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SARS病毒对乳鼠和鸡胚致病性的初步观察 病毒学
SARS病毒对乳鼠和鸡胚致病性的初步观察
于曼司炳银刘洪邓永强张雨范宝昌常国辉
甘永华王翠娥李豫川秦鄂德祝庆余
【摘要】目的建立SARS病毒的动物模型.方法选用1～5日龄的BALB/c乳鼠和昆明种乳
鼠,通过脑内,腹腔和鼻腔3种途径,分别接种自广州和北京地区非典型肺炎病人中分离的SARS病毒
BJ01和GZ01株,观察该病毒对不同种系小鼠的致病性.同时,选用8～10日龄鸡胚经尿囊腔接种这2
株病毒,观察对鸡胚的致病性.结果与结论采用SARS病毒BJ01和GZ01株经脑内接种,均可使
BALB/c乳鼠和昆明种乳鼠发病或死亡,但这种致病性不规律;而从腹腔和鼻腔途径接种病毒均不能
使乳鼠发病.鸡胚对该病毒不敏感.
【关键词】SARS病毒;非典型肺炎;动物模型;乳鼠
PathogenicityofSARScoronavirusinsucklingmiceandembryonatedeggsYUMan,SIBing-yin,LIU
Hong,DENGYong-qiang,ZHANGYu,FANBao-chang,CHANGGuo-hui,GANYong-hua,WANGCui-e,LI
Yu-chuan,QINE-de,ZHUQing-yu.InstituteofMicrobiologyandEpidemiology,AcademyofMilitaryMedical
Sciences,Beijing100071,China
Correspondingauthor:ZHUQin-yu,Email:zhuqy nic.bmi.ac.cn
【Abstract】ObjectiveTodevelopananimalmodelforSARScoronavirus(SARS-CoV)infection.
MethodsOnetofivedaysoldBALB/candKMmicewereinoculatedbySARS-CoVisolatedfromSARSpatients
ofGuangzhouandBeijingthroughintracranial,intraperitonealandintranasalroutes.Virusstrainswerealsoinocu-
latedintoallantoisof8-10doldembryonatedeggs.ThenthepathogenicityofSARS-CoVintheinoculatedanimals
wasobserved.ResultsandconclusionIrregularpathogenicityofSARS-CoVBJ01andGZ01strainstoBALB/c
andKMmicewereobservedwheninoculatedintracranially,whilethesucklingmicecouldnotbeinfectedbyintra-
peritonealandintranasalinoculation.TheembryonatedeggswerenotsensitivetoisolatedSARS-CoV.
【Keywords】SARScoronavirus;Atypicalpneumonia;Animalmodel;Sucklingmice
作者单位:100071北京,军事医学科学院微生物流行病研究所
通讯作者:祝庆余,Email:zhuqy@nic.bmi.ac.cn,电话:010-
66948604
由SARS(severeacuterespiratorysyndromevirus,
SARS)冠状病毒引起的非典型肺炎感染性强,传播速
度快,仅数月时间就波及到30多个国家,病死率高
达5%～15%〔1〕,目前仍缺乏特异有效的防治手段.
但对SARS的发病机理,疫苗及抗病毒药物的研究均
依赖于动物模型的建立.本研究在完成SARS病原
体分离鉴定的基础上,将新分离的SARS病毒分别经
脑内,腹腔和鼻腔3个途径接种乳小白鼠,观察该病
毒对小白鼠的致病性;与此同时还观察了SARS病毒
对鸡胚的致病性,为动物模型的建立提供依据.
材料和方法
毒株及细胞株:SARS病毒GZ01和BJ01株,由
本实验室从广州和北京非典型肺炎死亡病例的尸解
肺组织中分离,两毒株的基因组全序列已在美国
NIHGenBank注册,其登录号分别为GZ01:AY278489,
BJ01:AY278488.病毒毒力滴度:BJ01株CCID
50
8.5,
GZ01株CCID
50
8.0.非洲绿猴肾细胞Vero-E6,由本
所细胞库提供.
实验动物和鸡胚:1～3日龄BALB/c乳鼠和1～
5日龄昆明种小白鼠,由本院动物中心提供;8～10
日龄鸡胚,由中科院微通利华公司提供.
动物接种:用新分离的SARS病毒BJ01(CCID
50
8.5)和GZ01(CCID
50
8.0)株分别从3个途径接种乳
鼠.接种动物分组,实验组分为BJ01(BALB/c鼠3
窝,5只/窝;昆明种鼠3窝,9只/窝)和GZ01(BALB/c
鼠3窝,4只/窝;昆明种鼠3窝,10只/窝)2组.脑内
接种:取10-1悬液,0.02ml/只;腹腔接种:取原液,
0.03ml/只;鼻腔接种:取原液滴鼻,0.03ml/只;对照
组1组,BALB/c鼠3窝,5只/窝;昆明种鼠3窝,8只/
窝,分别用正常Vero-E6细胞培养液接种乳鼠,接种途
径和剂量同实验组.接种后逐日观察乳鼠发病情况.
鸡胚接种:取新分离的SARS病毒BJ01和GZ01
株,各接种4枚鸡胚,对照组2枚鸡胚.将病毒原液
接种9日龄鸡胚,每只鸡胚从尿囊腔接种病毒悬液 58 中华微生物学和免疫学杂志2004年2月第24卷第2期ChinJMicrobiolImmunol,February2004,Vol24,No.2
0.2ml.接种后置37℃温箱培养,逐日观察鸡胚生长
情况.
结果与讨论
本研究用自广州和北京地区传染性非典型肺炎
病人标本中新分离的SARS病毒BJ01和GZ01株,分
别从脑内,腹腔和鼻腔接种1～5日龄BALB/c和昆
明种乳鼠,以观察该病毒对不同种系小白鼠的致病
性.结果表明,经脑内分别接种BJ01和GZ01病毒
株均可致乳鼠发病死亡.接种SARS病毒后2d有7
只乳鼠发病,其中5只全身不同程度的出现出血点,
发病主要表现为震颤,弓背,嗜睡,全身发紫等症状
(图1).其中4只症状较重,7d后发病症状减轻并
渐渐恢复正常,另外3只死亡.12只乳鼠的死亡集
中于接种后24h至48h之间,这也表明该病毒致鼠
发病急,死亡快,但对于12～24h之前死亡的7只乳
鼠也存在非特异性死亡的情况.经腹腔和鼻腔途径
接种的乳鼠均未发病或死亡.实验中还发现,与脑
内接种BJ01株和GZ01株组的2窝BALB/c乳鼠同窝
哺乳母鼠,分别于8d和19d发病死亡.其原因可
能是与接种病毒的发病乳鼠密切接触,通过呼吸道
感染所致.但是,我们通过鼻腔接种BJ01株和GZ01
株病毒的昆明种乳鼠均未感染发病.该结果提示,
经呼吸道感染SARS病毒,成鼠可能比乳鼠敏感.此
外,我们还将BJ01和GZ01株病毒分别接种9日龄鸡
胚,接种后连续观察10d,结果只有1枚鸡胚于第8
天死亡,表明鸡胚对SARS病毒不敏感.
图1脑内接种SARS病毒株后BALB/c乳鼠发病情况
Fig1.BALB/csucklingmiceinoculatedintracraniallyby
SARSvirus
为进一步观察经脑内接种SARS病毒而使部分
乳鼠发病或死亡可否继续传代再使乳鼠发病,我们
将发病呈濒死状态(图1)的BALB/c乳鼠解剖,取脑
和肺组织分别研磨后,于脑内接种1～3日龄昆明种
乳鼠进行观察,并做电镜病理.结果显示,在第一代
发病鼠的肺泡上皮细胞中观察到冠状病毒样颗粒(2
和3),而且肺脏和肝脏均出现明显病变〔2〕.对肺组
织和脑组织进行RT-PCR检测可扩增出SARS病毒
特异带条(图4),经序列测定证实所扩增条带为
SARS病毒的特异序列.将第一代病鼠的肺组织研
磨物接种乳鼠1窝7只,结果发现在48～72h之内
死亡3只,而第5天发病1只,症状较轻,第7天后发
病症状减轻,随后恢复正常.而将该病鼠脑组织接
种乳鼠1窝8只,在24～72h之内无死亡,但5d后
有2只鼠相继发病.再取第2代发病鼠的脑组织于
脑内接种传第3代,我们连续观察了21d,除24h内
非特异性死亡1只外,其后再无鼠发病.结果表明,
于脑内接种SARS病毒可致部分乳鼠发病死亡,但不
能稳定传代.
图2发病乳鼠肺组织中SARS病毒颗粒的电镜观察
Fig2.TEMobservationofSARSvirusinthelungtissueof
infectedsucklingmice(lengthofthebar:100nm)
图3发病乳鼠脑组织悬液中SARS病毒颗粒的电镜
(负染)观察
Fig3.SARSvirusinthebrainsuspensionofinfectedsuck-
lingmice(negativestain,lengthofthebar:100nm)
68 中华微生物学和免疫学杂志2004年2月第24卷第2期ChinJMicrobiolImmunol,February2004,Vol24,No.2
图4SARS病毒分离株感染乳鼠的脑和肺组织的RT-
PCR扩增结果
Fig4.RT-PCRamplificationfrombrainandlungtissues
ofSARSvirusinfectedsucklingmice
M:DNAmarker;1:amplifiedfragmentfromisolatedSARSvirus,posi-
tivecontrol;2and3:amplifiedfragmentsfrombraintissueofinfectedsuck-
lingmice;4and5:amplifiedfragmentsfromlungtissuesofinfectedsuckling
mice;6:negativecontrol
上述结果也提示,经脑内接种的SARS病毒不
能在该组织中增殖;但可通过血脑屏障而进入肺组
织,进行增殖.因此,如果用该发病乳鼠的肺组织研
磨物进行连续传代,有可能使分离的SARS病毒在乳
鼠中稳定传代.该实验目前正在进行之中.
参考文献
1祝庆余,秦鄂德,王翠娥,等.非典型肺炎病例标本中新型冠状
病毒的分离与鉴定.中国生物工程杂志,2003,23:106-108.
2王翠娥,秦鄂德,甘永华,等.非典型肺炎标本中感染乳鼠和Ve-
ro-E6细胞的病理学观察.解放军医学杂志,2003,28:383-384.
3秦鄂德,祝庆余,彭文明,等.重症急性呼吸综合征病例尸解肺
组织中新型冠状病毒部分聚合酶基因的序列测定.军事医学科学
院院刊,2003,27:81-83.
(收稿日期:2003-06-10
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!)
细菌学
产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的分析
蔡琰范昕建吕晓菊陈文昭张磊戚超
对我院2001年10月～2002年5月
临床分离的30株非重复的产ESBLs大
肠埃希菌进行检测,了解CTX-M基因的
检出情况及产CTX-M酶大肠埃希菌的
耐药性和同源性.
采用琼脂平皿对倍稀释法进行耐药
表型检测,抗菌药物为头孢噻肟,头孢他
啶,头孢哌酮,头孢哌酮/舒巴坦,头孢吡
肟,氨曲南,头孢西丁,亚胺培南,环丙沙
星和阿米卡星.采用PCR方法进行β-
内酰胺酶基因型分析,对扩增的CTX-M
基因进行DNA序列分析,用PFGE分型
技术了解产CTX-M酶大肠埃希菌的同
源性.琼脂糖电泳结果表明30株产ESBLs
大肠埃希菌中有13株携带CTX-M基因,
基金项目:国家自然科学基金(NO.
39970675),国家教委博士点基金(NO.9847)
作者单位:610041成都,四川大学华西医院
通讯作者:范昕建,Email:fxj@scwgy.com,
电话:028-89629531
CTX-M亚型为CTX-M-3和CTX-M-14.
其中8株菌同时携带blaSHVDNA,2株
菌同时携带blaTEMDNA,3株菌同时携
带blaSHVDNA+blaTEMDNA.
13株产CTX-M酶菌株对不同抗菌
药物的耐药率由高到低依次为头孢哌酮
100%,环丙沙星100%,头孢噻肟
84.6%,头孢吡肟84.6%,阿米卡星
64.2%,头孢哌酮/舒巴坦38.5%,头孢
西丁30.8%,头孢他啶30.8%,氨曲南
15.4%,亚胺培南0%.其中头孢哌酮/
舒巴坦的MIC值较头孢哌酮下降4～128
倍,头孢噻肟MIC值为头孢他啶MIC值
的8～64倍.
本研究中9株产CTX-M酶大肠埃
希菌染色体PFGE图谱共分为7型.菌
株EC3和EC1有9条带数完全一致,属
同一克隆;菌株EC1和EC4有1条带不
同,属同一菌株的不同克隆亚型;余5株
菌分别属5种克隆.
产CTX-M酶菌株的耐药性既具有
产ESBLs菌株的一般特点,能水解头孢
菌素,单环β-内酰胺类抗生素,对酶抑制
剂敏感,同时又表现出对头孢噻肟的耐
药水平高于头孢他啶.TEM型,SHV型
ESBLs是在广谱酶TEM-1,2和SHV-1的
基础上发生1～4个氨基酸的改变衍生
而来,CTX-M酶没有相应的广谱酶基础,
目前认为其超广谱活性可能是其本质特
征而不是几个位点突变的结果.建议尽
快进行大规模多中心针对CTX-M酶的
研究.本研究中PFGE类型呈多克隆模
式,表明我院无优势克隆菌株存在.其
中菌株EC1和菌株EC4是同源菌却分
别产CTX-M-3和CTX-M-14,说明这2株
菌中CTX-M基因并非通过克隆传播而
来.菌株EC3,EC6,EC9,EC21属不同的
PFGE基因型,却均产CTX-M-3,说明可
能存在CTX-M基因转移或耐药质粒的
播散.
(收稿日期:2003-07-07)
78 中华微生物学和免疫学杂志2004年2月第24卷第2期ChinJMicrobiolImmunol,February2004,Vol24,No.2
409084
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SARS病毒对乳鼠和鸡胚致病性的初步观察
于曼司炳银刘洪邓永强张雨范宝昌常国辉
甘永华王翠娥李豫川秦鄂德祝庆余
【摘要】目的建立SARS病毒的动物模型.方法选用1～5日龄的BALB/c乳鼠和昆明种乳
鼠,通过脑内,腹腔和鼻腔3种途径,分别接种自广州和北京地区非典型肺炎病人中分离的SARS病毒
BJ01和GZ01株,观察该病毒对不同种系小鼠的致病性.同时,选用8～10日龄鸡胚经尿囊腔接种这2
株病毒,观察对鸡胚的致病性.结果与结论采用SARS病毒BJ01和GZ01株经脑内接种,均可使
BALB/c乳鼠和昆明种乳鼠发病或死亡,但这种致病性不规律;而从腹腔和鼻腔途径接种病毒均不能
使乳鼠发病.鸡胚对该病毒不敏感.
【关键词】SARS病毒;非典型肺炎;动物模型;乳鼠
PathogenicityofSARScoronavirusinsucklingmiceandembryonatedeggsYUMan,SIBing-yin,LIU
Hong,DENGYong-qiang,ZHANGYu,FANBao-chang,CHANGGuo-hui,GANYong-hua,WANGCui-e,LI
Yu-chuan,QINE-de,ZHUQing-yu.InstituteofMicrobiologyandEpidemiology,AcademyofMilitaryMedical
Sciences,Beijing100071,China
Correspondingauthor:ZHUQin-yu,Email:zhuqy nic.bmi.ac.cn
【Abstract】ObjectiveTodevelopananimalmodelforSARScoronavirus(SARS-CoV)infection.
MethodsOnetofivedaysoldBALB/candKMmicewereinoculatedbySARS-CoVisolatedfromSARSpatients
ofGuangzhouandBeijingthroughintracranial,intraperitonealandintranasalroutes.Virusstrainswerealsoinocu-
latedintoallantoisof8-10doldembryonatedeggs.ThenthepathogenicityofSARS-CoVintheinoculatedanimals
wasobserved.ResultsandconclusionIrregularpathogenicityofSARS-CoVBJ01andGZ01strainstoBALB/c
andKMmicewereobservedwheninoculatedintracranially,whilethesucklingmicecouldnotbeinfectedbyintra-
peritonealandintranasalinoculation.TheembryonatedeggswerenotsensitivetoisolatedSARS-CoV.
【Keywords】SARScoronavirus;Atypicalpneumonia;Animalmodel;Sucklingmice
作者单位:100071北京,军事医学科学院微生物流行病研究所
通讯作者:祝庆余,Email:zhuqy@nic.bmi.ac.cn,电话:010-
66948604
由SARS(severeacuterespiratorysyndromevirus,
SARS)冠状病毒引起的非典型肺炎感染性强,传播速
度快,仅数月时间就波及到30多个国家,病死率高
达5%～15%〔1〕,目前仍缺乏特异有效的防治手段.
但对SARS的发病机理,疫苗及抗病毒药物的研究均
依赖于动物模型的建立.本研究在完成SARS病原
体分离鉴定的基础上,将新分离的SARS病毒分别经
脑内,腹腔和鼻腔3个途径接种乳小白鼠,观察该病
毒对小白鼠的致病性;与此同时还观察了SARS病毒
对鸡胚的致病性,为动物模型的建立提供依据.
材料和方法
毒株及细胞株:SARS病毒GZ01和BJ01株,由
本实验室从广州和北京非典型肺炎死亡病例的尸解
肺组织中分离,两毒株的基因组全序列已在美国
NIHGenBank注册,其登录号分别为GZ01:AY278489,
BJ01:AY278488.病毒毒力滴度:BJ01株CCID
50
8.5,
GZ01株CCID
50
8.0.非洲绿猴肾细胞Vero-E6,由本
所细胞库提供.
实验动物和鸡胚:1～3日龄BALB/c乳鼠和1～
5日龄昆明种小白鼠,由本院动物中心提供;8～10
日龄鸡胚,由中科院微通利华公司提供.
动物接种:用新分离的SARS病毒BJ01(CCID
50
8.5)和GZ01(CCID
50
8.0)株分别从3个途径接种乳
鼠.接种动物分组,实验组分为BJ01(BALB/c鼠3
窝,5只/窝;昆明种鼠3窝,9只/窝)和GZ01(BALB/c
鼠3窝,4只/窝;昆明种鼠3窝,10只/窝)2组.脑内
接种:取10-1悬液,0.02ml/只;腹腔接种:取原液,
0.03ml/只;鼻腔接种:取原液滴鼻,0.03ml/只;对照
组1组,BALB/c鼠3窝,5只/窝;昆明种鼠3窝,8只/
窝,分别用正常Vero-E6细胞培养液接种乳鼠,接种途
径和剂量同实验组.接种后逐日观察乳鼠发病情况.
鸡胚接种:取新分离的SARS病毒BJ01和GZ01
株,各接种4枚鸡胚,对照组2枚鸡胚.将病毒原液
接种9日龄鸡胚,每只鸡胚从尿囊腔接种病毒悬液 58 中华微生物学和免疫学杂志2004年2月第24卷第2期ChinJMicrobiolImmunol,February2004,Vol24,No.2
0.2ml.接种后置37℃温箱培养,逐日观察鸡胚生长
情况.
结果与讨论
本研究用自广州和北京地区传染性非典型肺炎
病人标本中新分离的SARS病毒BJ01和GZ01株,分
别从脑内,腹腔和鼻腔接种1～5日龄BALB/c和昆
明种乳鼠,以观察该病毒对不同种系小白鼠的致病
性.结果表明,经脑内分别接种BJ01和GZ01病毒
株均可致乳鼠发病死亡.接种SARS病毒后2d有7
只乳鼠发病,其中5只全身不同程度的出现出血点,
发病主要表现为震颤,弓背,嗜睡,全身发紫等症状
(图1).其中4只症状较重,7d后发病症状减轻并
渐渐恢复正常,另外3只死亡.12只乳鼠的死亡集
中于接种后24h至48h之间,这也表明该病毒致鼠
发病急,死亡快,但对于12～24h之前死亡的7只乳
鼠也存在非特异性死亡的情况.经腹腔和鼻腔途径
接种的乳鼠均未发病或死亡.实验中还发现,与脑
内接种BJ01株和GZ01株组的2窝BALB/c乳鼠同窝
哺乳母鼠,分别于8d和19d发病死亡.其原因可
能是与接种病毒的发病乳鼠密切接触,通过呼吸道
感染所致.但是,我们通过鼻腔接种BJ01株和GZ01
株病毒的昆明种乳鼠均未感染发病.该结果提示,
经呼吸道感染SARS病毒,成鼠可能比乳鼠敏感.此
外,我们还将BJ01和GZ01株病毒分别接种9日龄鸡
胚,接种后连续观察10d,结果只有1枚鸡胚于第8
天死亡,表明鸡胚对SARS病毒不敏感.
图1脑内接种SARS病毒株后BALB/c乳鼠发病情况
Fig1.BALB/csucklingmiceinoculatedintracraniallyby
SARSvirus
为进一步观察经脑内接种SARS病毒而使部分
乳鼠发病或死亡可否继续传代再使乳鼠发病,我们
将发病呈濒死状态(图1)的BALB/c乳鼠解剖,取脑
和肺组织分别研磨后,于脑内接种1～3日龄昆明种
乳鼠进行观察,并做电镜病理.结果显示,在第一代
发病鼠的肺泡上皮细胞中观察到冠状病毒样颗粒(2
和3),而且肺脏和肝脏均出现明显病变〔2〕.对肺组
织和脑组织进行RT-PCR检测可扩增出SARS病毒
特异带条(图4),经序列测定证实所扩增条带为
SARS病毒的特异序列.将第一代病鼠的肺组织研
磨物接种乳鼠1窝7只,结果发现在48～72h之内
死亡3只,而第5天发病1只,症状较轻,第7天后发
病症状减轻,随后恢复正常.而将该病鼠脑组织接
种乳鼠1窝8只,在24～72h之内无死亡,但5d后
有2只鼠相继发病.再取第2代发病鼠的脑组织于
脑内接种传第3代,我们连续观察了21d,除24h内
非特异性死亡1只外,其后再无鼠发病.结果表明,
于脑内接种SARS病毒可致部分乳鼠发病死亡,但不
能稳定传代.
图2发病乳鼠肺组织中SARS病毒颗粒的电镜观察
Fig2.TEMobservationofSARSvirusinthelungtissueof
infectedsucklingmice(lengthofthebar:100nm)
图3发病乳鼠脑组织悬液中SARS病毒颗粒的电镜
(负染)观察
Fig3.SARSvirusinthebrainsuspensionofinfectedsuck-
lingmice(negativestain,lengthofthebar:100nm)
68 中华微生物学和免疫学杂志2004年2月第24卷第2期ChinJMicrobiolImmunol,February2004,Vol24,No.2
图4SARS病毒分离株感染乳鼠的脑和肺组织的RT-
PCR扩增结果
Fig4.RT-PCRamplificationfrombrainandlungtissues
ofSARSvirusinfectedsucklingmice
M:DNAmarker;1:amplifiedfragmentfromisolatedSARSvirus,posi-
tivecontrol;2and3:amplifiedfragmentsfrombraintissueofinfectedsuck-
lingmice;4and5:amplifiedfragmentsfromlungtissuesofinfectedsuckling
mice;6:negativecontrol
上述结果也提示,经脑内接种的SARS病毒不
能在该组织中增殖;但可通过血脑屏障而进入肺组
织,进行增殖.因此,如果用该发病乳鼠的肺组织研
磨物进行连续传代,有可能使分离的SARS病毒在乳
鼠中稳定传代.该实验目前正在进行之中.
参考文献
1祝庆余,秦鄂德,王翠娥,等.非典型肺炎病例标本中新型冠状
病毒的分离与鉴定.中国生物工程杂志,2003,23:106-108.
2王翠娥,秦鄂德,甘永华,等.非典型肺炎标本中感染乳鼠和Ve-
ro-E6细胞的病理学观察.解放军医学杂志,2003,28:383-384.
3秦鄂德,祝庆余,彭文明,等.重症急性呼吸综合征病例尸解肺
组织中新型冠状病毒部分聚合酶基因的序列测定.军事医学科学
院院刊,2003,27:81-83.
(收稿日期:2003-06-10
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!)
细菌学
产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的分析
蔡琰范昕建吕晓菊陈文昭张磊戚超
对我院2001年10月～2002年5月
临床分离的30株非重复的产ESBLs大
肠埃希菌进行检测,了解CTX-M基因的
检出情况及产CTX-M酶大肠埃希菌的
耐药性和同源性.
采用琼脂平皿对倍稀释法进行耐药
表型检测,抗菌药物为头孢噻肟,头孢他
啶,头孢哌酮,头孢哌酮/舒巴坦,头孢吡
肟,氨曲南,头孢西丁,亚胺培南,环丙沙
星和阿米卡星.采用PCR方法进行β-
内酰胺酶基因型分析,对扩增的CTX-M
基因进行DNA序列分析,用PFGE分型
技术了解产CTX-M酶大肠埃希菌的同
源性.琼脂糖电泳结果表明30株产ESBLs
大肠埃希菌中有13株携带CTX-M基因,
基金项目:国家自然科学基金(NO.
39970675),国家教委博士点基金(NO.9847)
作者单位:610041成都,四川大学华西医院
通讯作者:范昕建,Email:fxj@scwgy.com,
电话:028-89629531
CTX-M亚型为CTX-M-3和CTX-M-14.
其中8株菌同时携带blaSHVDNA,2株
菌同时携带blaTEMDNA,3株菌同时携
带blaSHVDNA+blaTEMDNA.
13株产CTX-M酶菌株对不同抗菌
药物的耐药率由高到低依次为头孢哌酮
100%,环丙沙星100%,头孢噻肟
84.6%,头孢吡肟84.6%,阿米卡星
64.2%,头孢哌酮/舒巴坦38.5%,头孢
西丁30.8%,头孢他啶30.8%,氨曲南
15.4%,亚胺培南0%.其中头孢哌酮/
舒巴坦的MIC值较头孢哌酮下降4～128
倍,头孢噻肟MIC值为头孢他啶MIC值
的8～64倍.
本研究中9株产CTX-M酶大肠埃
希菌染色体PFGE图谱共分为7型.菌
株EC3和EC1有9条带数完全一致,属
同一克隆;菌株EC1和EC4有1条带不
同,属同一菌株的不同克隆亚型;余5株
菌分别属5种克隆.
产CTX-M酶菌株的耐药性既具有
产ESBLs菌株的一般特点,能水解头孢
菌素,单环β-内酰胺类抗生素,对酶抑制
剂敏感,同时又表现出对头孢噻肟的耐
药水平高于头孢他啶.TEM型,SHV型
ESBLs是在广谱酶TEM-1,2和SHV-1的
基础上发生1～4个氨基酸的改变衍生
而来,CTX-M酶没有相应的广谱酶基础,
目前认为其超广谱活性可能是其本质特
征而不是几个位点突变的结果.建议尽
快进行大规模多中心针对CTX-M酶的
研究.本研究中PFGE类型呈多克隆模
式,表明我院无优势克隆菌株存在.其
中菌株EC1和菌株EC4是同源菌却分
别产CTX-M-3和CTX-M-14,说明这2株
菌中CTX-M基因并非通过克隆传播而
来.菌株EC3,EC6,EC9,EC21属不同的
PFGE基因型,却均产CTX-M-3,说明可
能存在CTX-M基因转移或耐药质粒的
播散.
(收稿日期:2003-07-07)
78 中华微生物学和免疫学杂志2004年2月第24卷第2期ChinJMicrobiolImmunol,February2004,Vol24,No.2
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