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大鼠骨癌痛模型背根神经节中P2X3受体表达的变化大鼠骨癌痛模型背根神经节中P2X3受体表达的变化
解放军总医院麻醉科 100853
姜雨鸽 张宏
目的 建立大鼠骨癌痛模型,观察该疼痛模型背根神经节(DRG)中P2X3受体表达的变化,探讨P2X3受体在骨癌痛发病机理中的作用,为骨癌痛的治疗提供理论依据.方法 ①骨癌痛模型的制备:雌性SD大鼠,左侧胫骨内注射不同剂量walker256肉瘤细胞,接种肿瘤细胞后1d,3d,5d,7d,10d,14d观察触诱发痛和CO2激光热痛敏痛阈变化,并在实验结束后观察有无淋巴结或其他脏器的转移.取双侧胫骨及肺,肝,脾,肾,脑做病理切片HE染色,光学显微镜下观察肿瘤的生长及脏器的转移.以大鼠出现明显触诱发痛和热痛敏阈值降低,且病理切片证实肿瘤细胞生长作为癌痛模型成功指标.②骨癌痛大鼠DRG中P2X3受体表达的变化:随机取5只大鼠作为正常对照组(C组);10只骨癌痛模型,分为PD7,PD14组,每组各5只,分别于接种104/ul的walker256细胞后7d和14d处死.冰上取L4-6脊髓背根神经节,Trizol法提取背根神经节总RNA,逆转录PCR和Western-blot方法检测P2X3受体mRNA和蛋白表达的变化.结果 ①骨癌痛模型:接受不同浓度walker256细胞的大鼠疼痛症状及痛敏阈值的改变出现时间存在明显不同.接种104/ul的walker256细胞后7天大鼠出现明显触诱发痛和热痛觉过敏,此后疼痛症状进行性加重.接种103/ul的walker256细胞后10~14d才出现痛敏症状.而接种大剂量肿瘤细胞(105/ul)的大鼠在出现疼痛症状的同时,体重明显减轻,其中一只大鼠经病理切片证实存在淋巴结和肺的转移病灶.各组大鼠接种细胞后14d行胫骨病理切片可见肿瘤组织在骨髓腔内浸润性生长,破坏骨质.②与正常大鼠比较,骨癌痛大鼠P2X3受体mRNA和蛋白表达均于接种肿瘤细胞7d开始出现下降(P<0.05),且14d组进一步降低(P<0.01).结论 胫骨内接种Walker256细胞可产生时间,剂量依赖的疼痛行为学改变,适合作为癌症性疼痛动物模型用于癌症性疼痛的机制及治疗研究.P2X3受体mRNA和蛋白表达在骨癌痛动物背根神经节中的表达水平均上调,提示该通道参与癌痛的发生过程.
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解放军总医院麻醉科 100853
姜雨鸽 张宏
目的 建立大鼠骨癌痛模型,观察该疼痛模型背根神经节(DRG)中P2X3受体表达的变化,探讨P2X3受体在骨癌痛发病机理中的作用,为骨癌痛的治疗提供理论依据.方法 ①骨癌痛模型的制备:雌性SD大鼠,左侧胫骨内注射不同剂量walker256肉瘤细胞,接种肿瘤细胞后1d,3d,5d,7d,10d,14d观察触诱发痛和CO2激光热痛敏痛阈变化,并在实验结束后观察有无淋巴结或其他脏器的转移.取双侧胫骨及肺,肝,脾,肾,脑做病理切片HE染色,光学显微镜下观察肿瘤的生长及脏器的转移.以大鼠出现明显触诱发痛和热痛敏阈值降低,且病理切片证实肿瘤细胞生长作为癌痛模型成功指标.②骨癌痛大鼠DRG中P2X3受体表达的变化:随机取5只大鼠作为正常对照组(C组);10只骨癌痛模型,分为PD7,PD14组,每组各5只,分别于接种104/ul的walker256细胞后7d和14d处死.冰上取L4-6脊髓背根神经节,Trizol法提取背根神经节总RNA,逆转录PCR和Western-blot方法检测P2X3受体mRNA和蛋白表达的变化.结果 ①骨癌痛模型:接受不同浓度walker256细胞的大鼠疼痛症状及痛敏阈值的改变出现时间存在明显不同.接种104/ul的walker256细胞后7天大鼠出现明显触诱发痛和热痛觉过敏,此后疼痛症状进行性加重.接种103/ul的walker256细胞后10~14d才出现痛敏症状.而接种大剂量肿瘤细胞(105/ul)的大鼠在出现疼痛症状的同时,体重明显减轻,其中一只大鼠经病理切片证实存在淋巴结和肺的转移病灶.各组大鼠接种细胞后14d行胫骨病理切片可见肿瘤组织在骨髓腔内浸润性生长,破坏骨质.②与正常大鼠比较,骨癌痛大鼠P2X3受体mRNA和蛋白表达均于接种肿瘤细胞7d开始出现下降(P<0.05),且14d组进一步降低(P<0.01).结论 胫骨内接种Walker256细胞可产生时间,剂量依赖的疼痛行为学改变,适合作为癌症性疼痛动物模型用于癌症性疼痛的机制及治疗研究.P2X3受体mRNA和蛋白表达在骨癌痛动物背根神经节中的表达水平均上调,提示该通道参与癌痛的发生过程.
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