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冻干甲型肝炎减毒活疫苗冻干甲型肝炎减毒活疫苗
Donggan Jianxing Ganyan Jiandu Huoyimiao
Hepatitis A Vaccine(Live),Freeze-dried
本品系用甲型肝炎 (简称甲肝) 病毒减毒株接种人二倍体细胞,经培养,收获,提纯病毒,加入适宜稳定剂后冻干制成,用于预防甲型肝炎.
1基本要求
生产和检定用设施,原材料及辅料,水,器具,动物,等应符合"凡例"有关要求.
2制造
2. 1 生产用细胞
生产用细胞为人二倍体细胞(2BS 株, KMB17株或其他批准的细胞株).
2. 1. 1 细胞库管理及检定
应符合"生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程"规定.
取自同批工作细胞库的1支或多支细胞管, 经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产.
2BS株原始细胞库细胞代次应不超过第14代,主细胞库细胞代次应不超过第31代, 工作细胞库细胞代次应不超过第44代.KMB17株原始细胞库细胞代次应不超过第 6代,主细胞库细胞代次应不超过第15代,工作细胞库细胞代次应不超过第45代;
2. 1. 2 细胞制备
取工作细胞库中的1支或多支细胞管,复苏后混合培养,成单层后,用适宜浓度的胰蛋白酶消化,置37±0.5℃静置或旋转培养.
2. 2 毒种
2. 2. 1 名称及来源
生产用毒种为甲型肝炎病毒H2或L-A-1减毒株.
2. 2. 2 种子批的建立
应符合"生物制品生产和检定用菌毒种管理规程"规定.
H2减毒株原始种子批传代应不超过第7代,主种子批应不超过第8代,工作种子批应不超过第14代,生产的疫苗病毒代次应不超过第15代;L-A-1株原始种子批传代应不超过第17代,主种子批应不超过第18代,工作种子批应不超过第26代,生产的疫苗病毒代次应不超过第27代.
2. 2. 3 种子批检定
主种子批应进行以下全面检定,工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.4项检定.
2. 2. 3. 1 鉴别试验
用甲型肝炎病毒特异高效价免疫血清与500~1000CCID50/ml甲型肝炎病毒等量混合,置37℃水浴60分钟,接种人二倍体细胞,置35℃培养至病毒增殖高峰期,提取甲型肝炎病毒后用酶联免疫法测定,经中和的培养物检测结果应为阴性(证明甲型肝炎病毒应完全中和), 未经中和的病毒液检测结果应为阳性(应证明为甲型肝炎病毒).
2. 2. 3. 2 病毒滴定
将毒种作10倍系列稀释,取至少3个稀释度, 分别接种人二倍体细胞,置35℃培养至病毒增殖高峰期,收获后提取甲型肝炎病毒,用酶联免疫法进行病毒滴定,病毒滴度应不低于6.50 LgCCID50/ml.
2. 2. 3.3 无菌检查
依法检查(附录XⅡ A), 应符合规定.
2.2.3.4 支原体检查
依法检查(附录XⅡ B), 应符合规定.
2. 2. 3. 5 病毒外源因子检查
依法检查(附录XⅡ C), 应符合规定.供试品可不经甲型肝炎病毒抗特异性免疫血清中和,直接接种小鼠观察.
2. 2. 3. 6 免疫原性检查
用主种子批制备原疫苗,按常规接种甲型肝炎易感者至少40名,分别于免疫前及免疫后6~8周采血,血清抗体阳转率应不低于90%.
2. 2. 3. 7 猴体安全及免疫原性试验
用主种子批制备的疫苗做猴体试验.取甲型肝炎病毒抗体阴性,丙氨酸氨基转移酶指标正常,体重为1.5-4.5 kg的健康恒河猴或红面猴5只,于下肢静脉注射疫苗1.0ml,滴度应不低于6.50 LgCCID50/ml.试验猴于第0,4,8周肝穿刺做组织病理检查.于第0周,第2周,第3周,第4周,第6周,第8周采血测定丙氨酸氨基转移酶及甲型肝炎病毒抗体.应设2只猴为阴性对照.
试验组符合下列情况者判定合格:
(1)至少4只猴抗体阳转;
(2)血清丙氨酸氨基转移酶有一过性(1周次)升高者不超过2只猴;
(3)肝组织无与接种供试品有关的病理改变.
有下列情况之一者可重试:
(1)接种猴抗体阳转率低于4/5;
(2)抗体阳转前后两周内血清丙氨酸氨基转移酶异常升高超过2次;
(3)试验猴不能排除其他原因所致的肝组织病理改变.
重试后仍出现上述情况之一者,判为不合格.
2. 2. 4 毒种保存
毒种应置-60℃以下保存.
2. 3 原液
2. 3. 1 细胞制备
同2.1.2项.
2. 3. 2 培养液
培养液为含适量灭能新生小牛血清的MEM或其他适宜培养液.新生牛血清的质量应符合规定(附录XIII D), 且甲肝抗体检测应为阴性.
2. 3. 3 对照细胞外源因子检查
依法检查(附录XⅡ C ), 应符合规定.
2. 3. 4 病毒接种和培养
取工作种子批毒种按适宜MOI接种于人二倍体细胞(同一工作种子批应按同一MOI接种),于35±0.5℃培养, 培养期间, 根据细胞生长情况, 可用不少于原倍培养液量的洗液充分洗涤细胞表面以去除牛血清,并换加维持液或其他适宜的液体继续培养.
2.3.5 病毒收获物
于病毒增殖高峰期,采用适宜浓度的胰蛋白酶或其他适宜方法消化含甲肝病毒的细胞,并经离心或其他适宜的方法收集含甲肝病毒的细胞为病毒收获物.
2.3.6 病毒收获物检定
按3.1项进行.
2.3.7 病毒收获物保存
于-20℃以下保存,保存时间按批准的执行.
2.3.7 病毒提取
检定合格的病毒收获物经冻融和(或)超声波处理, 并采用适宜浓度的三氯甲烷抽提以提纯病毒.
2. 3. 8 合并
同一细胞批生产的病毒收获物经提取病毒后合并为一批原液.
2. 3.9原液检定
按3.2项进行.
2.3.10 原液保存
于2～8℃保存,保存时间按批准的执行.
2. 4 半成品
2.4.1 配制
用疫苗稀释液将原液按同一病毒滴度进行配制,并加入适量稳定剂,即为半成品.
2. 4.2 半成品检定
按3.3项进行.
2. 5 成品
2. 5. 1 分批
应符合"生物制品分批规程"规定.
2. 5.2 分装及冻干
应符合"生物制品分装和冻干规程"规定.
2.5. 3 规格
复溶后每瓶0.5ml或1.0ml. 每1次人用剂量为0.5ml或1.0ml,含甲型肝炎活病毒应不低于6.50 LgCCID50.
2. 5. 4 包装
应符合"生物制品包装规程"规定.
3 检定
3. 1 病毒收获物检定
3. 1. 1 病毒滴定
按2.2.3.2项进行,病毒滴度应不低于7.00 LgCCID50/ml.
3. 1. 2 无菌检查
依法检查(附录XⅡA),应符合规定.
3.1.3 支原体检查
依法检查(附录XⅡ B),应符合规定.
3.2 原液检定
3. 2. 1 病毒滴定
按2.2.3.2项进行,病毒滴度应不低于7.00 LgCCID50/ml.
3. 2. 2 无菌检查
依法检查(附录XⅡA),应符合规定.
3.2.3 支原体检查
依法检查(附录XⅡ B),应符合规定.
3. 3 半成品检定
无菌检查
依法检查(附录XⅡ A), 应符合规定.
3.4 成品检定
除水分测定外,应按标示量加入灭菌注射用水,复溶后进行以下各项检定.
3.4.1 鉴别试验
采用酶联免疫法进行测定,应证明含有甲型肝炎病毒抗原.
3. 4. 2 外观
应为乳酪色疏松体,复溶后为澄明液体,无异物.
3. 4.3 水分
应不高于3.0 %(附录VⅡD).
3.4.4 三氯甲烷残留量
应不高于0.006 %,(附录 VI V )
3.4.5 抗生素残留量检查
生产过程中加入抗生素的应进行该项检查. 采用酶联免疫法检测, 应不超过10ng/ml.
3. 4. 6 病毒滴定
取疫苗3-5瓶供试品混合滴定,按2.2.3.2项进行,病毒滴度应不低于6.50LgCCID50/ml.
3.4.7 热稳定性试验
疫苗出厂前应进行热稳定性试验, 应与病毒滴定同时进行. 于37℃放置72小时后,按2.2.3.2项进行,病毒滴度应不滴于6.50 LgCCID50/ml, 病毒滴度下降应不高于0.50 Lg.
3. 4. 8 无菌检查
依法检查(附录XⅡ A),应符合规定.
3. 4. 9 异常毒性检查
依法检查(附录XⅡ F),应符合规定.
3. 4. 10 牛血清白蛋白残留量
应不高于50 ng/剂(附录 VIII F).
4保存,运输及有效期
于2~8℃避光保存和运输,自生产之日起,有效期为18个月.
5 疫苗稀释剂
疫苗稀释剂为灭菌注射用水,应符合对疫苗稀释剂有关要求.
5.1疫苗稀释剂装量
5.2 疫苗稀释剂包装
5.3 疫苗稀释稀释剂有效期
5.4 疫苗稀释剂批准文号
5.5 疫苗稀释剂生产企业
6 说明书
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Donggan Jianxing Ganyan Jiandu Huoyimiao
Hepatitis A Vaccine(Live),Freeze-dried
本品系用甲型肝炎 (简称甲肝) 病毒减毒株接种人二倍体细胞,经培养,收获,提纯病毒,加入适宜稳定剂后冻干制成,用于预防甲型肝炎.
1基本要求
生产和检定用设施,原材料及辅料,水,器具,动物,等应符合"凡例"有关要求.
2制造
2. 1 生产用细胞
生产用细胞为人二倍体细胞(2BS 株, KMB17株或其他批准的细胞株).
2. 1. 1 细胞库管理及检定
应符合"生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程"规定.
取自同批工作细胞库的1支或多支细胞管, 经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产.
2BS株原始细胞库细胞代次应不超过第14代,主细胞库细胞代次应不超过第31代, 工作细胞库细胞代次应不超过第44代.KMB17株原始细胞库细胞代次应不超过第 6代,主细胞库细胞代次应不超过第15代,工作细胞库细胞代次应不超过第45代;
2. 1. 2 细胞制备
取工作细胞库中的1支或多支细胞管,复苏后混合培养,成单层后,用适宜浓度的胰蛋白酶消化,置37±0.5℃静置或旋转培养.
2. 2 毒种
2. 2. 1 名称及来源
生产用毒种为甲型肝炎病毒H2或L-A-1减毒株.
2. 2. 2 种子批的建立
应符合"生物制品生产和检定用菌毒种管理规程"规定.
H2减毒株原始种子批传代应不超过第7代,主种子批应不超过第8代,工作种子批应不超过第14代,生产的疫苗病毒代次应不超过第15代;L-A-1株原始种子批传代应不超过第17代,主种子批应不超过第18代,工作种子批应不超过第26代,生产的疫苗病毒代次应不超过第27代.
2. 2. 3 种子批检定
主种子批应进行以下全面检定,工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.4项检定.
2. 2. 3. 1 鉴别试验
用甲型肝炎病毒特异高效价免疫血清与500~1000CCID50/ml甲型肝炎病毒等量混合,置37℃水浴60分钟,接种人二倍体细胞,置35℃培养至病毒增殖高峰期,提取甲型肝炎病毒后用酶联免疫法测定,经中和的培养物检测结果应为阴性(证明甲型肝炎病毒应完全中和), 未经中和的病毒液检测结果应为阳性(应证明为甲型肝炎病毒).
2. 2. 3. 2 病毒滴定
将毒种作10倍系列稀释,取至少3个稀释度, 分别接种人二倍体细胞,置35℃培养至病毒增殖高峰期,收获后提取甲型肝炎病毒,用酶联免疫法进行病毒滴定,病毒滴度应不低于6.50 LgCCID50/ml.
2. 2. 3.3 无菌检查
依法检查(附录XⅡ A), 应符合规定.
2.2.3.4 支原体检查
依法检查(附录XⅡ B), 应符合规定.
2. 2. 3. 5 病毒外源因子检查
依法检查(附录XⅡ C), 应符合规定.供试品可不经甲型肝炎病毒抗特异性免疫血清中和,直接接种小鼠观察.
2. 2. 3. 6 免疫原性检查
用主种子批制备原疫苗,按常规接种甲型肝炎易感者至少40名,分别于免疫前及免疫后6~8周采血,血清抗体阳转率应不低于90%.
2. 2. 3. 7 猴体安全及免疫原性试验
用主种子批制备的疫苗做猴体试验.取甲型肝炎病毒抗体阴性,丙氨酸氨基转移酶指标正常,体重为1.5-4.5 kg的健康恒河猴或红面猴5只,于下肢静脉注射疫苗1.0ml,滴度应不低于6.50 LgCCID50/ml.试验猴于第0,4,8周肝穿刺做组织病理检查.于第0周,第2周,第3周,第4周,第6周,第8周采血测定丙氨酸氨基转移酶及甲型肝炎病毒抗体.应设2只猴为阴性对照.
试验组符合下列情况者判定合格:
(1)至少4只猴抗体阳转;
(2)血清丙氨酸氨基转移酶有一过性(1周次)升高者不超过2只猴;
(3)肝组织无与接种供试品有关的病理改变.
有下列情况之一者可重试:
(1)接种猴抗体阳转率低于4/5;
(2)抗体阳转前后两周内血清丙氨酸氨基转移酶异常升高超过2次;
(3)试验猴不能排除其他原因所致的肝组织病理改变.
重试后仍出现上述情况之一者,判为不合格.
2. 2. 4 毒种保存
毒种应置-60℃以下保存.
2. 3 原液
2. 3. 1 细胞制备
同2.1.2项.
2. 3. 2 培养液
培养液为含适量灭能新生小牛血清的MEM或其他适宜培养液.新生牛血清的质量应符合规定(附录XIII D), 且甲肝抗体检测应为阴性.
2. 3. 3 对照细胞外源因子检查
依法检查(附录XⅡ C ), 应符合规定.
2. 3. 4 病毒接种和培养
取工作种子批毒种按适宜MOI接种于人二倍体细胞(同一工作种子批应按同一MOI接种),于35±0.5℃培养, 培养期间, 根据细胞生长情况, 可用不少于原倍培养液量的洗液充分洗涤细胞表面以去除牛血清,并换加维持液或其他适宜的液体继续培养.
2.3.5 病毒收获物
于病毒增殖高峰期,采用适宜浓度的胰蛋白酶或其他适宜方法消化含甲肝病毒的细胞,并经离心或其他适宜的方法收集含甲肝病毒的细胞为病毒收获物.
2.3.6 病毒收获物检定
按3.1项进行.
2.3.7 病毒收获物保存
于-20℃以下保存,保存时间按批准的执行.
2.3.7 病毒提取
检定合格的病毒收获物经冻融和(或)超声波处理, 并采用适宜浓度的三氯甲烷抽提以提纯病毒.
2. 3. 8 合并
同一细胞批生产的病毒收获物经提取病毒后合并为一批原液.
2. 3.9原液检定
按3.2项进行.
2.3.10 原液保存
于2～8℃保存,保存时间按批准的执行.
2. 4 半成品
2.4.1 配制
用疫苗稀释液将原液按同一病毒滴度进行配制,并加入适量稳定剂,即为半成品.
2. 4.2 半成品检定
按3.3项进行.
2. 5 成品
2. 5. 1 分批
应符合"生物制品分批规程"规定.
2. 5.2 分装及冻干
应符合"生物制品分装和冻干规程"规定.
2.5. 3 规格
复溶后每瓶0.5ml或1.0ml. 每1次人用剂量为0.5ml或1.0ml,含甲型肝炎活病毒应不低于6.50 LgCCID50.
2. 5. 4 包装
应符合"生物制品包装规程"规定.
3 检定
3. 1 病毒收获物检定
3. 1. 1 病毒滴定
按2.2.3.2项进行,病毒滴度应不低于7.00 LgCCID50/ml.
3. 1. 2 无菌检查
依法检查(附录XⅡA),应符合规定.
3.1.3 支原体检查
依法检查(附录XⅡ B),应符合规定.
3.2 原液检定
3. 2. 1 病毒滴定
按2.2.3.2项进行,病毒滴度应不低于7.00 LgCCID50/ml.
3. 2. 2 无菌检查
依法检查(附录XⅡA),应符合规定.
3.2.3 支原体检查
依法检查(附录XⅡ B),应符合规定.
3. 3 半成品检定
无菌检查
依法检查(附录XⅡ A), 应符合规定.
3.4 成品检定
除水分测定外,应按标示量加入灭菌注射用水,复溶后进行以下各项检定.
3.4.1 鉴别试验
采用酶联免疫法进行测定,应证明含有甲型肝炎病毒抗原.
3. 4. 2 外观
应为乳酪色疏松体,复溶后为澄明液体,无异物.
3. 4.3 水分
应不高于3.0 %(附录VⅡD).
3.4.4 三氯甲烷残留量
应不高于0.006 %,(附录 VI V )
3.4.5 抗生素残留量检查
生产过程中加入抗生素的应进行该项检查. 采用酶联免疫法检测, 应不超过10ng/ml.
3. 4. 6 病毒滴定
取疫苗3-5瓶供试品混合滴定,按2.2.3.2项进行,病毒滴度应不低于6.50LgCCID50/ml.
3.4.7 热稳定性试验
疫苗出厂前应进行热稳定性试验, 应与病毒滴定同时进行. 于37℃放置72小时后,按2.2.3.2项进行,病毒滴度应不滴于6.50 LgCCID50/ml, 病毒滴度下降应不高于0.50 Lg.
3. 4. 8 无菌检查
依法检查(附录XⅡ A),应符合规定.
3. 4. 9 异常毒性检查
依法检查(附录XⅡ F),应符合规定.
3. 4. 10 牛血清白蛋白残留量
应不高于50 ng/剂(附录 VIII F).
4保存,运输及有效期
于2~8℃避光保存和运输,自生产之日起,有效期为18个月.
5 疫苗稀释剂
疫苗稀释剂为灭菌注射用水,应符合对疫苗稀释剂有关要求.
5.1疫苗稀释剂装量
5.2 疫苗稀释剂包装
5.3 疫苗稀释稀释剂有效期
5.4 疫苗稀释剂批准文号
5.5 疫苗稀释剂生产企业
6 说明书
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