文件类型：DOC/Microsoft Word 文件大小：字节
凋亡基因相关蛋白,雄激素受体在前列腺癌中
表达及临床意义
江西省萍乡市第三人民医院泌尿外科 李挺山 叶正飞,337000
南昌大学第一附属医院泌尿外科 孙庭,360000
摘 要
目的:研究凋亡相关基因蛋白,雄激素受体(AR),前列腺癌细胞核形态在前列腺癌中的表达及其与病理分级,临床分期及预后的关系.方法:应用免疫组化方法结合图像分析法检测28例前列腺癌组织中AR与bcl-2,前列腺癌细胞核与细胞面积(A-N/C)值的关系进行定量分析.结果:AR在前列腺癌组织中表达与前列腺癌的病理分级无相关性(P 0.05),而与前列腺癌的临床分期及预后有密切关系(P＜0.05).bcl-2在前列腺癌组织中表达与前列腺癌的病理分级,临床分期有密切关系(P＜0.05),随着病理分级,临床分期的上升,其表达不断增高(P＜0.01).在前列腺癌中,bcl-2蛋白的表达与AR之间也存在相关性(P＜0.05).并认为图像分析技术在免疫组化定量分析,生物体视学中具有重要应用价值.结论: AR,bcl-2蛋白的表达在前列腺癌的恶性进展过程中有重要意义,将三者结合分析,对于前列腺癌病理分级,临床分期及预后的判断更为准确.
关键词:前列腺癌 雄激素受体 bcl-2蛋白 免疫组化 图像分析
EXPRESSIONS O F AR AND BCL-2 PROTEIN IN PROSTATE CARCINOMA AND
THEIR CLINICAL SIGNIFICANCE
TING SHAN LI ZHENGFEIYE TING SUN
ABSTRACT
Objective: To study the expressions of apoptosis-associated gene,AR and A-N/C in prostate carcinoma(PCa) ,in order to evaluate their clinical significance.
Methods: 28 cases of PCa have been studied by immuhistochemical technique and image analysis technique.
Result: The postive expression of AR was mainly located in nucleus and has no significant with Gleason grading of prostate carcinoma (P 0.05).However,the expression of AR showed negative correlation with the clinical staging and prognosis of this tumor( P＜0.05). The prostive expression of the bcl-2 was mainly located in cytoplasm and the expression of the bcl-2 showed positive correlation with Gleason grading and clinical staging of this tumor ( P＜0.01). There was a relation between AR and bcl-2,and a relation between AR (P＜0.05). The quantitative image analysis technique is helpful to identify immuhistochemical technique.
Conclusion:There were significant between AR ,bcl-2 in PCa.They all had significant with progression of prostate carcinoma . To study them , we can know Gleason grading and clinical staging in PCa clearly .
Key words: Prostate Carcinoma AR Bcl-2Protein Immunohistochemical ImageAnalysis Technique
前 言
前列腺癌是欧美国家仅次于肺癌的第二位恶性肿瘤,在中国,其发生率虽然不高,但近几年呈明显上升趋势.细胞凋亡是细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,自己结束其生命的过程,最后细胞脱落离体或裂解为若干凋亡小体,被其他细胞吞噬.其与前列腺癌的关系日益受到人们重视.前列腺是人类最大的男性副性器官, AR表达的定性和定量的改变在PCa的发生,发展中作用及与内分泌治疗之间的关系受到人们的关注.前列腺癌中的Bcl-2的过度表达可以抑制程序性细胞死亡而阻碍或延迟正常的细胞分化,有助于肿瘤发生.图像分析法是近几年来,日渐成熟的一种半定量,定量的检测方法[5],运用图像分析法对凋亡相关基因蛋白与雄激素受体的表达内在联系,以及其各项指对临床价值的研究目前尚无完整的报告.本研究目的是通过对前列腺癌的生物学行为更精确的了解,更有效地指导临床该疾病的治疗.
材料和方法
一,标本来源
28例标本取自1998年至2001年江西医学院第一附属医院行手术,或穿刺标本,所有患者经病理诊断,且术前均未行内分泌治疗,放疗和化疗.标本过小,临床资料不全不作研究.所有标本经10%福尔马林液固定,常规石蜡包埋.28例标本中,年龄52 岁—— 78 岁,平均 65±2.39岁.病理分级按Gleason评分标准:2~4分为Ⅰ级( 6例),5~7分为Ⅱ级 (14例),8~10分为Ⅲ级 (8例).临床分期按 Whitmore-Jewett标准:A期 4例,B期 11例,C期9 例,D期4 例.
二,主要仪器及试剂
CMIAS真彩色病理图象分析仪(北京);
鼠抗人AR单克隆抗体.(购自福建迈新公司)即用型 克隆号(2H12)
鼠抗人Bcl-2单克隆抗体.(购自福建迈新公司)即用型 克隆号(100/D5)
DAB显色剂(临时配制)
免疫组化试剂盒.(购自福建迈新公司)
三,试验方法
所用石蜡标本均连续切片,片厚4 m,共4张,其中1张作常规HE染色.两张作AR,Bcl-2免疫组化染色, 1张以PBS液代替一抗作为阴性对照,已知阳性乳腺癌切片作AR,Bcl-2阳性对照(试剂公司提供).
HE染色.(步骤略) (2)免疫组化染色(SP法)
四,统计处理方法
本资料属于计数资料,PCa各组间比较用卡方检验,若差异有统计意义则用方差齐性检验法进行组间两两比较;bcl-2蛋白的表达与AR之间则用精确的卡方检验,生存率曲线采用Kaplan-Meier法绘制,并作Log- rank test 检验.
结 果
一,AR在前列腺癌中的测定
1,AR与前列腺癌病理分级的关系
表1 AR在前列腺癌病理分级中的表达
病理 A R
PU值 合 计 阳性率 强阳性率
分级 0-15 15-50 50
Ⅰ级 2 3 1 6 66% 17%
Ⅱ级 4 7 3 14 71% 13% ±1.2
Ⅲ级 2 3 3 8 75% 37%±4.4
合计 8 13 7 28 70% 25%
表1显示,AR阳性率的表达与前列腺癌的病理分级无关.而AR强阳性率表达与前列腺癌的病理分级有关.其中Ⅲ级与Ⅰ级,Ⅱ级有显著性差异.
2 ,AR与前列腺癌临床分期的关系
表2 AR在前列腺癌临床分期中的表达
病理 A R
PU值 合 计 阳性率 强阳性率
分期 0-15 15-50 50
A期 0 2 2 4 100% 50%
B期 2 7 2 11 81% 18%
C期 3 4 2 9 66% 19%
D期 3 1 0 4 25% 0%
合计 8 14 6 28 68% 21%
说明AR表达在除B期与C期无差异外,其余各期均有差异.
3,AR与前列腺癌预后之间的关系.
本试验28例,除2例失访外,26例均随访3个月-36个月.按Kaplan-Meier法绘制累积生存率曲线图,经时序检验(log rank test) 卡方检验χ2=4.08 P＜0.05.差异有统计学意义.AR表达阳性(PU值 50)生存率明显高于阴性者(PU值<50).
生存率曲线图如下:
二, bcl-2与前列腺癌的关系
1, bcl-2与前列腺癌病理分级的关系
表3 bcl-2在前列腺癌病理分级中的表达
病理 bcl-2
PU值 合 计 阳性率 强阳性率
分期 0-15 15-50 50
Ⅰ级 6 0 0 6 0% 0%
Ⅱ级 10 3 1 14 29% 8%
Ⅲ级 4 2 2 8 50% 25%
合计 20 5 3 28 33% 9%
显示bcl-2蛋白阳性表达与前列腺癌的病理分级Ⅰ级与Ⅲ级,Ⅱ级与Ⅲ中有显著性差异,而Ⅰ级与Ⅱ级则无相关性.
2,bcl-2与前列腺癌临床分期的关系
表4 bcl-2与前列腺癌临床分期中的关系
临床 bcl-2
PU值 合 计 阳性率 强阳性率
分期 0-15 15-50 50
A期 3 1 0 4 33% 0%
B期 2 6 3 11 81% 27%
C期 2 5 2 9 77% 22%
D期 0 2 2 4 100% 50%
合计 7 14 7 28 72% 25%
显示A期与C期,D期有显著性差异,B期与C期,D期以及C期与D期有统计意义.而A期与B期则无相关性.
讨 论
前列腺癌是欧美国家仅次于肺癌的第二位恶性肿瘤,在中国,其发生率虽然不高,但近几年呈明显上升趋势.而前列腺癌凋亡相关基因bcl-2与AR和前列腺癌密切相关.
AR在前列腺癌的意义
雄激素受体基因定位于X染色体长臂q11-12区,总长度大于54Kb,编码917氨基酸,雄激素受体广泛存在于全身各组织,前列腺上皮细胞及部分基质细胞中.近年来,AR表达的定性和定量的改变在前列腺癌(PCa)的发生,发展中作用及与内分泌治疗之间的关系受到人们的关注.吴阶平等[9](1962)对26位前清太监检测,无一例前列腺增生(BPH)发生.Latil等[12]对AR基因在种族的遗传性方面的研究发现,在262例PCa患者与156例同种族的健康人群比较,得出AR[(CGA)n]的重复与PCa发病年龄有关.Leav等[13]研究:用GC-17抗体对AR的免疫组化研究发现,AR染色在PCa基底细胞存在多样性,而在分泌腺泡和基质细胞中呈强阳性表达,在所有转移性细胞中,AR均呈阳性表达.王晓惠等[17]采用PCR-SSCP(单链构象多态性)-DNA双链循环测序法对27例PCa石蜡切片组织的AR N端AF区突变进行检测,用DNA测序法确定PCa组织AR基因外显示中的CAG重复数目[(CGA)n],结果发现在国人PCa组织中,AR N端AF区发现了2种新的AR基因突变型,突变AR的(CAG)n重复数目均低于平均水平.Pacrick westin[18]等通过对18例早期前列腺癌患者调查,去势治疗对于介导凋亡的细胞增殖的研究表明13例对去势治疗早期明显发现细胞凋亡现象.
目前,合理的激素治疗对于前列腺癌患者十分重要,所以能够准确预示激素治疗反应治疗的指标对病人治疗的选择有很大益处,对于PCa中AR的定性,定量及分布上的变化与激素治疗反应之间的关系,目前已进行了一些研究.我们的研究发现,AR表达水平与预后相关.AR的表达与前列腺癌的病理分级无关(P 0.05),提示AR与前列腺癌的恶性程度无关.AR的表达与前列腺癌的临床分期有密切关系(P＜0.05),随着临床分期的上升,其表达不断下降,提示AR与前列腺癌自然病程有关.
二,bcl-2在前列腺癌中的关系
Bcl-2最初是从t(14,18)(q32,q21)的滤泡型淋巴瘤中分离鉴定得到的,它位于18q21-3,长230Kb,为端粒到着丝点方向,它编码25KD的蛋白含239个氨基酸,分子量24×103,位于核膜,内质网和线粒体膜上.Bcl-2含有3个外显子.Bcl-2基因蛋白表达产物定位于线粒体膜,核膜和内质网.在其氨基酸的C-末端有一由19个氨基酸组成的疏水性片段,并借此与膜相连[3].Vax等[4]证明bcl-2高表达,可明显延长细胞的生长期,引发肿瘤的形成,但它对细胞的增殖没有明显的影响.研究认为,bcl-2蛋白调节细胞生长可能机制有:(1)抑制细胞内质网中钙离子的释放;(2)通过调节抗氧途径来抑制细胞凋亡;(3)通过直接或间接地与细胞信号传递蛋白如(P53蛋白)作用而调控细胞死亡.Bcl-2的过度表达可以抑制程序性细胞死亡而阻碍或延迟正常的细胞分化,从而延长细胞生命,使细胞数量增多,基因变化的可能性增加,有助于肿瘤发生,通过免疫组化在基底(basal epithelial cells)中有低水平的表达,而在不同分期的PCa及经激素治疗后转移的PCa组织中则有高水平的表达,其表达水平与癌细胞的分化程度相关,分化越低的PCa中bcl-2表达越高.bcl-2 是一种细胞凋亡抑制基因,它一方面使应该凋亡的细胞长期存活,增加恶变的机会;另一方面,它使已有DNA损伤的细胞不能及时被清除而有助于癌症的形成[20].Szostak 等[28]人对前列腺癌的放射治疗的研究中发现,治疗后PCa的凋亡率远大于治疗前(3.1/2%)(P<0.05),在治疗失败组中Bcl-2的表达明显比成功组要高(13.1/30.5% P50
AR:PU<50
97598
·上一篇：做自己的医疗四分卫
·下一篇：治疗骨转移癌
表达及临床意义
江西省萍乡市第三人民医院泌尿外科 李挺山 叶正飞,337000
南昌大学第一附属医院泌尿外科 孙庭,360000
摘 要
目的:研究凋亡相关基因蛋白,雄激素受体(AR),前列腺癌细胞核形态在前列腺癌中的表达及其与病理分级,临床分期及预后的关系.方法:应用免疫组化方法结合图像分析法检测28例前列腺癌组织中AR与bcl-2,前列腺癌细胞核与细胞面积(A-N/C)值的关系进行定量分析.结果:AR在前列腺癌组织中表达与前列腺癌的病理分级无相关性(P 0.05),而与前列腺癌的临床分期及预后有密切关系(P＜0.05).bcl-2在前列腺癌组织中表达与前列腺癌的病理分级,临床分期有密切关系(P＜0.05),随着病理分级,临床分期的上升,其表达不断增高(P＜0.01).在前列腺癌中,bcl-2蛋白的表达与AR之间也存在相关性(P＜0.05).并认为图像分析技术在免疫组化定量分析,生物体视学中具有重要应用价值.结论: AR,bcl-2蛋白的表达在前列腺癌的恶性进展过程中有重要意义,将三者结合分析,对于前列腺癌病理分级,临床分期及预后的判断更为准确.
关键词:前列腺癌 雄激素受体 bcl-2蛋白 免疫组化 图像分析
EXPRESSIONS O F AR AND BCL-2 PROTEIN IN PROSTATE CARCINOMA AND
THEIR CLINICAL SIGNIFICANCE
TING SHAN LI ZHENGFEIYE TING SUN
ABSTRACT
Objective: To study the expressions of apoptosis-associated gene,AR and A-N/C in prostate carcinoma(PCa) ,in order to evaluate their clinical significance.
Methods: 28 cases of PCa have been studied by immuhistochemical technique and image analysis technique.
Result: The postive expression of AR was mainly located in nucleus and has no significant with Gleason grading of prostate carcinoma (P 0.05).However,the expression of AR showed negative correlation with the clinical staging and prognosis of this tumor( P＜0.05). The prostive expression of the bcl-2 was mainly located in cytoplasm and the expression of the bcl-2 showed positive correlation with Gleason grading and clinical staging of this tumor ( P＜0.01). There was a relation between AR and bcl-2,and a relation between AR (P＜0.05). The quantitative image analysis technique is helpful to identify immuhistochemical technique.
Conclusion:There were significant between AR ,bcl-2 in PCa.They all had significant with progression of prostate carcinoma . To study them , we can know Gleason grading and clinical staging in PCa clearly .
Key words: Prostate Carcinoma AR Bcl-2Protein Immunohistochemical ImageAnalysis Technique
前 言
前列腺癌是欧美国家仅次于肺癌的第二位恶性肿瘤,在中国,其发生率虽然不高,但近几年呈明显上升趋势.细胞凋亡是细胞在一定的生理或病理条件下,遵循自身的程序,自己结束其生命的过程,最后细胞脱落离体或裂解为若干凋亡小体,被其他细胞吞噬.其与前列腺癌的关系日益受到人们重视.前列腺是人类最大的男性副性器官, AR表达的定性和定量的改变在PCa的发生,发展中作用及与内分泌治疗之间的关系受到人们的关注.前列腺癌中的Bcl-2的过度表达可以抑制程序性细胞死亡而阻碍或延迟正常的细胞分化,有助于肿瘤发生.图像分析法是近几年来,日渐成熟的一种半定量,定量的检测方法[5],运用图像分析法对凋亡相关基因蛋白与雄激素受体的表达内在联系,以及其各项指对临床价值的研究目前尚无完整的报告.本研究目的是通过对前列腺癌的生物学行为更精确的了解,更有效地指导临床该疾病的治疗.
材料和方法
一,标本来源
28例标本取自1998年至2001年江西医学院第一附属医院行手术,或穿刺标本,所有患者经病理诊断,且术前均未行内分泌治疗,放疗和化疗.标本过小,临床资料不全不作研究.所有标本经10%福尔马林液固定,常规石蜡包埋.28例标本中,年龄52 岁—— 78 岁,平均 65±2.39岁.病理分级按Gleason评分标准:2~4分为Ⅰ级( 6例),5~7分为Ⅱ级 (14例),8~10分为Ⅲ级 (8例).临床分期按 Whitmore-Jewett标准:A期 4例,B期 11例,C期9 例,D期4 例.
二,主要仪器及试剂
CMIAS真彩色病理图象分析仪(北京);
鼠抗人AR单克隆抗体.(购自福建迈新公司)即用型 克隆号(2H12)
鼠抗人Bcl-2单克隆抗体.(购自福建迈新公司)即用型 克隆号(100/D5)
DAB显色剂(临时配制)
免疫组化试剂盒.(购自福建迈新公司)
三,试验方法
所用石蜡标本均连续切片,片厚4 m,共4张,其中1张作常规HE染色.两张作AR,Bcl-2免疫组化染色, 1张以PBS液代替一抗作为阴性对照,已知阳性乳腺癌切片作AR,Bcl-2阳性对照(试剂公司提供).
HE染色.(步骤略) (2)免疫组化染色(SP法)
四,统计处理方法
本资料属于计数资料,PCa各组间比较用卡方检验,若差异有统计意义则用方差齐性检验法进行组间两两比较;bcl-2蛋白的表达与AR之间则用精确的卡方检验,生存率曲线采用Kaplan-Meier法绘制,并作Log- rank test 检验.
结 果
一,AR在前列腺癌中的测定
1,AR与前列腺癌病理分级的关系
表1 AR在前列腺癌病理分级中的表达
病理 A R
PU值 合 计 阳性率 强阳性率
分级 0-15 15-50 50
Ⅰ级 2 3 1 6 66% 17%
Ⅱ级 4 7 3 14 71% 13% ±1.2
Ⅲ级 2 3 3 8 75% 37%±4.4
合计 8 13 7 28 70% 25%
表1显示,AR阳性率的表达与前列腺癌的病理分级无关.而AR强阳性率表达与前列腺癌的病理分级有关.其中Ⅲ级与Ⅰ级,Ⅱ级有显著性差异.
2 ,AR与前列腺癌临床分期的关系
表2 AR在前列腺癌临床分期中的表达
病理 A R
PU值 合 计 阳性率 强阳性率
分期 0-15 15-50 50
A期 0 2 2 4 100% 50%
B期 2 7 2 11 81% 18%
C期 3 4 2 9 66% 19%
D期 3 1 0 4 25% 0%
合计 8 14 6 28 68% 21%
说明AR表达在除B期与C期无差异外,其余各期均有差异.
3,AR与前列腺癌预后之间的关系.
本试验28例,除2例失访外,26例均随访3个月-36个月.按Kaplan-Meier法绘制累积生存率曲线图,经时序检验(log rank test) 卡方检验χ2=4.08 P＜0.05.差异有统计学意义.AR表达阳性(PU值 50)生存率明显高于阴性者(PU值<50).
生存率曲线图如下:
二, bcl-2与前列腺癌的关系
1, bcl-2与前列腺癌病理分级的关系
表3 bcl-2在前列腺癌病理分级中的表达
病理 bcl-2
PU值 合 计 阳性率 强阳性率
分期 0-15 15-50 50
Ⅰ级 6 0 0 6 0% 0%
Ⅱ级 10 3 1 14 29% 8%
Ⅲ级 4 2 2 8 50% 25%
合计 20 5 3 28 33% 9%
显示bcl-2蛋白阳性表达与前列腺癌的病理分级Ⅰ级与Ⅲ级,Ⅱ级与Ⅲ中有显著性差异,而Ⅰ级与Ⅱ级则无相关性.
2,bcl-2与前列腺癌临床分期的关系
表4 bcl-2与前列腺癌临床分期中的关系
临床 bcl-2
PU值 合 计 阳性率 强阳性率
分期 0-15 15-50 50
A期 3 1 0 4 33% 0%
B期 2 6 3 11 81% 27%
C期 2 5 2 9 77% 22%
D期 0 2 2 4 100% 50%
合计 7 14 7 28 72% 25%
显示A期与C期,D期有显著性差异,B期与C期,D期以及C期与D期有统计意义.而A期与B期则无相关性.
讨 论
前列腺癌是欧美国家仅次于肺癌的第二位恶性肿瘤,在中国,其发生率虽然不高,但近几年呈明显上升趋势.而前列腺癌凋亡相关基因bcl-2与AR和前列腺癌密切相关.
AR在前列腺癌的意义
雄激素受体基因定位于X染色体长臂q11-12区,总长度大于54Kb,编码917氨基酸,雄激素受体广泛存在于全身各组织,前列腺上皮细胞及部分基质细胞中.近年来,AR表达的定性和定量的改变在前列腺癌(PCa)的发生,发展中作用及与内分泌治疗之间的关系受到人们的关注.吴阶平等[9](1962)对26位前清太监检测,无一例前列腺增生(BPH)发生.Latil等[12]对AR基因在种族的遗传性方面的研究发现,在262例PCa患者与156例同种族的健康人群比较,得出AR[(CGA)n]的重复与PCa发病年龄有关.Leav等[13]研究:用GC-17抗体对AR的免疫组化研究发现,AR染色在PCa基底细胞存在多样性,而在分泌腺泡和基质细胞中呈强阳性表达,在所有转移性细胞中,AR均呈阳性表达.王晓惠等[17]采用PCR-SSCP(单链构象多态性)-DNA双链循环测序法对27例PCa石蜡切片组织的AR N端AF区突变进行检测,用DNA测序法确定PCa组织AR基因外显示中的CAG重复数目[(CGA)n],结果发现在国人PCa组织中,AR N端AF区发现了2种新的AR基因突变型,突变AR的(CAG)n重复数目均低于平均水平.Pacrick westin[18]等通过对18例早期前列腺癌患者调查,去势治疗对于介导凋亡的细胞增殖的研究表明13例对去势治疗早期明显发现细胞凋亡现象.
目前,合理的激素治疗对于前列腺癌患者十分重要,所以能够准确预示激素治疗反应治疗的指标对病人治疗的选择有很大益处,对于PCa中AR的定性,定量及分布上的变化与激素治疗反应之间的关系,目前已进行了一些研究.我们的研究发现,AR表达水平与预后相关.AR的表达与前列腺癌的病理分级无关(P 0.05),提示AR与前列腺癌的恶性程度无关.AR的表达与前列腺癌的临床分期有密切关系(P＜0.05),随着临床分期的上升,其表达不断下降,提示AR与前列腺癌自然病程有关.
二,bcl-2在前列腺癌中的关系
Bcl-2最初是从t(14,18)(q32,q21)的滤泡型淋巴瘤中分离鉴定得到的,它位于18q21-3,长230Kb,为端粒到着丝点方向,它编码25KD的蛋白含239个氨基酸,分子量24×103,位于核膜,内质网和线粒体膜上.Bcl-2含有3个外显子.Bcl-2基因蛋白表达产物定位于线粒体膜,核膜和内质网.在其氨基酸的C-末端有一由19个氨基酸组成的疏水性片段,并借此与膜相连[3].Vax等[4]证明bcl-2高表达,可明显延长细胞的生长期,引发肿瘤的形成,但它对细胞的增殖没有明显的影响.研究认为,bcl-2蛋白调节细胞生长可能机制有:(1)抑制细胞内质网中钙离子的释放;(2)通过调节抗氧途径来抑制细胞凋亡;(3)通过直接或间接地与细胞信号传递蛋白如(P53蛋白)作用而调控细胞死亡.Bcl-2的过度表达可以抑制程序性细胞死亡而阻碍或延迟正常的细胞分化,从而延长细胞生命,使细胞数量增多,基因变化的可能性增加,有助于肿瘤发生,通过免疫组化在基底(basal epithelial cells)中有低水平的表达,而在不同分期的PCa及经激素治疗后转移的PCa组织中则有高水平的表达,其表达水平与癌细胞的分化程度相关,分化越低的PCa中bcl-2表达越高.bcl-2 是一种细胞凋亡抑制基因,它一方面使应该凋亡的细胞长期存活,增加恶变的机会;另一方面,它使已有DNA损伤的细胞不能及时被清除而有助于癌症的形成[20].Szostak 等[28]人对前列腺癌的放射治疗的研究中发现,治疗后PCa的凋亡率远大于治疗前(3.1/2%)(P<0.05),在治疗失败组中Bcl-2的表达明显比成功组要高(13.1/30.5% P50
AR:PU<50
97598
·上一篇：做自己的医疗四分卫
·下一篇：治疗骨转移癌
