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以往激素的检测都是在整体水平上进行的,通
常采用放射免疫分析,酶联免疫法!"#等,都必须经过
样品处理,获取含有激素的溶液,然后进行测定.虽
然从宏观上可以了解机体激素分泌大小,但不能有
效地把激素分泌与特定地单个细胞结合起来.
本实验采用逆向溶血斑法($%&%$'%(%)*+,-./
0+123%1''1,,4567)!8#从单个细胞水平上检测小鼠
睾丸间质细胞睾酮的分泌,根据溶血斑直径大小可
以判断睾酮分泌量的多少.该方法简单明了,最大的
优点在于把激素分泌与单个细胞联系起来,而且保
持了细胞的活性,可以结合免疫组织化学,电镜技术
等进一步研究细胞的结构和功能.
"材料与方法
"9"主要试剂
:";;培养基购自 @公司;蛋白7,多聚赖氨酸,睾丸
酮抗体购自A.B)1公司;绵羊红细胞购自北京大学医学部;补
体取自兔耳静脉.
"98小鼠睾丸间质细胞的制备
睾丸采自8CD月龄小鼠,参照:1EF3-.等的方法进行处理:
睾丸在新鲜6>A液中清洗DCG次,剥离被膜;在平皿中用镊子
将睾丸组织拔散,后用铜网筛过滤,"HII$J).E离心H).E,沉
淀物用:";;培养液稀释至"K"ILJ)+,台盼蓝染色计算细胞存
活率(M;HN).
"9D绵羊红细胞与蛋白O7的偶联
")+蛋白7(I9H)BJ)+生理盐水)与"I)+三氯化铬(I9"
)BJ)+生理盐水)混合,然后加入")+聚集的除血浆的绵羊红
细胞.DIP水浴"(,离心除三氯化铬.最后,偶联蛋白O7的绵
羊红细胞与赖氏细胞混合.
"9G涂板培养
"9G9"载玻片小室的制备包被有多聚赖氨酸的载玻片上粘
上两条双面胶,间距为8I)),然后将盖玻片覆盖在双面胶
上.
"9G98混合细胞涂片用:";;将偶联有蛋白7的绵羊红细胞
与睾丸间质细胞稀释,然后通过毛吸作用使混合细胞平铺在
载玻片上.
"9G9D细胞培养将载玻片放入DGP二氧化碳培养箱中培养
GH).E后,用:";;冲去未贴壁的细胞;加睾丸酮抗体培养D(
文章编号Q"II;OIII8R8IIDSI"OII8DOI8研究报告
逆向溶血斑法检测小鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌
吴国华!朱宝长
R首都师范大学生物系!北京"###$%&
摘要:用逆向溶血斑法检测单个小鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌,为进一步研究单个睾丸间质细胞的结构和功能提供
一种有效的途径.结果表明,分泌睾酮的睾丸间质细胞周围形成空斑,空斑面积随睾酮分泌增加而增大.说明只要获
得抗体,逆向溶血斑法就可以检测任何细胞的分泌物.
关键词:逆向溶血斑法T睾丸间质细胞T睾酮
中图分类号!UHV;9""文献标识码:7
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收稿日期:8II8OIVO"8
基金项目:国家自然科学基金项目(D;;VIHHD)
作者简介:吴国华(";VLO),硕士研究生.eO)1.+:_3/(.E1f,%1(9E%-
生物技术通讯
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生物技术通讯
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左右,加入补体培养2;.
8结果与讨论
离体培养的睾丸间质细胞分泌睾酮,经免疫反
应与睾酮抗体结合,加入补体时睾丸间质细胞周围
的绵羊红细胞破裂,就会形成溶血空斑(图2).
在培养过程中,经;*,刺激的睾丸间质细胞睾
酮分泌的量增多,形成的溶血斑就越大.随机从
;*,刺激的赖氏细胞和对照组中测量溶血斑的最大
直径,比较两者在不同培养时间形成溶血斑的平均
大小(图8),从图中看出,根据溶血斑大小可以半定
量的测出睾酮分泌多少.
本实验虽然步骤简单,但是抗体,补体等加入的
量需要根据自己实验的实际情况进行摸索.我们采
用现有的抗原加入偶联有蛋白@ 1北京:人民军医出版社,
89991:88
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图2未经;*,刺激的睾丸间质细胞周围形成的溶血斑
图8;*,刺激与对照组溶血斑大小示意图
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·下一篇：1证明激素生理作用的实验
常采用放射免疫分析,酶联免疫法!"#等,都必须经过
样品处理,获取含有激素的溶液,然后进行测定.虽
然从宏观上可以了解机体激素分泌大小,但不能有
效地把激素分泌与特定地单个细胞结合起来.
本实验采用逆向溶血斑法($%&%$'%(%)*+,-./
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睾丸间质细胞睾酮的分泌,根据溶血斑直径大小可
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优点在于把激素分泌与单个细胞联系起来,而且保
持了细胞的活性,可以结合免疫组织化学,电镜技术
等进一步研究细胞的结构和功能.
"材料与方法
"9"主要试剂
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酮抗体购自A.B)1公司;绵羊红细胞购自北京大学医学部;补
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睾丸采自8CD月龄小鼠,参照:1EF3-.等的方法进行处理:
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细胞.DIP水浴"(,离心除三氯化铬.最后,偶联蛋白O7的绵
羊红细胞与赖氏细胞混合.
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"9G9"载玻片小室的制备包被有多聚赖氨酸的载玻片上粘
上两条双面胶,间距为8I)),然后将盖玻片覆盖在双面胶
上.
"9G98混合细胞涂片用:";;将偶联有蛋白7的绵羊红细胞
与睾丸间质细胞稀释,然后通过毛吸作用使混合细胞平铺在
载玻片上.
"9G9D细胞培养将载玻片放入DGP二氧化碳培养箱中培养
GH).E后,用:";;冲去未贴壁的细胞;加睾丸酮抗体培养D(
文章编号Q"II;OIII8R8IIDSI"OII8DOI8研究报告
逆向溶血斑法检测小鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌
吴国华!朱宝长
R首都师范大学生物系!北京"###$%&
摘要:用逆向溶血斑法检测单个小鼠睾丸间质细胞睾酮的分泌,为进一步研究单个睾丸间质细胞的结构和功能提供
一种有效的途径.结果表明,分泌睾酮的睾丸间质细胞周围形成空斑,空斑面积随睾酮分泌增加而增大.说明只要获
得抗体,逆向溶血斑法就可以检测任何细胞的分泌物.
关键词:逆向溶血斑法T睾丸间质细胞T睾酮
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8结果与讨论
离体培养的睾丸间质细胞分泌睾酮,经免疫反
应与睾酮抗体结合,加入补体时睾丸间质细胞周围
的绵羊红细胞破裂,就会形成溶血空斑(图2).
在培养过程中,经;*,刺激的睾丸间质细胞睾
酮分泌的量增多,形成的溶血斑就越大.随机从
;*,刺激的赖氏细胞和对照组中测量溶血斑的最大
直径,比较两者在不同培养时间形成溶血斑的平均
大小(图8),从图中看出,根据溶血斑大小可以半定
量的测出睾酮分泌多少.
本实验虽然步骤简单,但是抗体,补体等加入的
量需要根据自己实验的实际情况进行摸索.我们采
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图2未经;*,刺激的睾丸间质细胞周围形成的溶血斑
图8;*,刺激与对照组溶血斑大小示意图
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