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遗传HEREDITAS (Beijing) 3(6)7 4--6 1981
产前筛选胎儿神经管缺损的免疫学方法''
郑振群顾素娟韩玉茹王玉英
(山西医学院生殖免疫研究室,太原)(北京市计划生育研究室)
根据许多国家统计指出,每5个死亡的婴
儿中就有1个是先天性畸形川.在所有出生的
婴儿中有畸形者高达6,其中以神经管缺损
(包括无脑儿,脊柱裂,脑膨出)〔们最为常见.神经
管缺损的发病率有地理差异,变化在1痴-7偏
之间,多数国家为2痴[4]o 1973年发现,神经管
缺损这类疾病,可利用免疫学方法(定量测定母
血甲胎蛋白的含量)在妊娠的第16-20周作出
诊断.妊娠早期引产,可避免畸形婴儿的出生.
这对家庭及国家都有好处.当前,我国号召每
对妇夫最好生一个孩子,因此,人们当然希望
自己生出一个健康的孩子.产前预测胎儿是否
患有神经管缺损,为健康孩子的出生提供了可
有旨.
正常孕妇血中甲胎蛋白含量一般在25-
400 ng/ml之间.测定如此低水平的甲胎蛋白,
国外普遍采用放射免疫测定法CIOI.但此法不仅
需要特殊设备,而且操作也很繁杂.目前,在我
国尚不能作为常规方法在医院普遍采用.我们
试用已经建立的免疫扩散放射自显影术Ci7测
定了母血甲胎蛋白含量获得满意结果,现报告
于下.
材料和方法
选择末次月经日期准确的孕妇作为检查对
象,这些孕妇的妊周为13-40周.妊周从末次
月经的第一天起,以整周计算.检查和随访病人
共计889例,均查阅病历及分娩记录,依无妊娠
合并症并出生健康单胎婴儿的母血甲胎蛋白含
量制定正常值范围.以国外多数实验室采用的
正常值的97.5位数作为判断正常及异常妊娠
的临界值.
每一孕妇自静脉采血2毫升,分出血清存
斗℃冰箱待检.一般在当日或次日进行测定.用
免疫扩散放射自显影法测定甲胎蛋白含量Ian
其方法简述如下:(1)先在6X10厘米玻片上涂
布一层2多的琼脂,在70℃烤箱中烤干;(2)将
甲胎蛋白单价抗血清(北京生物制品研究所出
售)按1:20,000加入已溶化并冷至560C的1外
的琼脂(用生理盐水配制)中,快速混匀,倾注在
上述处理过的玻片上,每片10毫升,待凝;(3)每
片打孔18个,孔径3毫米,孔距10毫米;(幼各
孔分别加人每毫升含有25,50,100,200,400,
800毫微克的标准甲胎蛋白的参考抗原和病人
血清,每孔15微升;(5)然后在各孔中分别加
碘标记的甲胎蛋白(中国科学院原子能研究所
供应)1微升(约6,000-12,000脉冲/分);(6)
放人湿润的密闭容器中,在37℃反应24小时,
取出后小心用水漂洗20分钟,70℃烤干;(7)
在暗室(箱)中,紧贴一张6X10厘米的X光胶
片,再盖一张同样大小的玻片,用皮筋扎紧,装
人黑纸袋中,曝光8-24小时(视同位素强度而
定);(8)按常法冲洗胶片,可见片上出现大小
不等的黑色反应扩散圈(图1); (9)先测量各
种标准参考抗原扩散圈的直径(毫米,纵座标)
和含量(毫微克/毫升,横座标),绘制标准曲线
图(图2); (10)然后分别测量病人血清的扩散
圈,查标准曲线,即可得知甲胎蛋白的含量.
本法对甲胎蛋白的最低可测量值为25ng/
MI,检测范围为25-800ng/ml,甲胎蛋白含量
大于800 ng/ml的样品应作适当的稀释.
Zheng Zhenqun et al.: Prenatal Diagnosis for Fetal
Neural-tube Defect by Immunological Metho!
1)本研究资料的统计处理由山西医学院卫生统计教研室
解宝鑫讲师协助,特此致谢.
4
2.若以97.5务位数作为临界线,正常孕妇
血中甲胎蛋白含量应有97务以上分布在此值
的下面,超过此线者不能大于3 0%o.我们测定
的695名正常孕妇的结果正好符合这一要求.
从图3可以看出,有97.1多(675/695)分布在
临界值的下面,只有2.9多(20/695)超过这个
临界值.这与国外报告也是一致的[[4,6,7,10]n
1600 688
图1免疫扩散放射自显影
注:孔1一6为2 5-800 ng/ml标准参考抗原的扩
散圈,孔7和13为正常人血清(甲胎蛋白在25 ng/
ml以下),孔周为松散的黑影.孔10和11以及12为
妊YR 18周和32周母血及16周羊水(1:20)中甲胎
蛋白的扩散结果,其余孔均为肝病病人血清,其中16
及17孔甲胎蛋白已超过800 ng/ml,经稀释后(is
孔)才能测出.
患肝炎,肝硬化,肝癌时血中亦可出现甲胎蛋白.以
妊妇血中甲胎蛋白诊断神经管缺损时,应排除各种
肝病.
一三谕.}扭顺鉴叶翻甫
均数
妊周
图3 695例13-40妊周正常孕妇血中甲胎蛋白分
布及4例开放性神经管缺损(▲)的结果
户行三}毋祠运趣经,伯
实验结果
1.国外不少实验室所测定的孕妇血中甲胎
蛋白正常值分布范围都大致相同[4,6,7,101.从妊
娠的第12周开始高于正常非孕妇水平,随妊周
增加逐渐升高,至31-34周达高峰,以后又逐
渐下降.我们的结果亦与此相同(图3)0
3.在随访的孕妇中有4例分别生出4个无
脑儿,其中3例母血甲胎蛋白含量超过了临界
线(28周1例,1600 ng/ml; 33周1例356 ng/
ml; 37周1例688 ng/ml),还有1例的甲胎蛋
白在临界值的下面(36周162 ng/ml)系假阴性
结果.对开放性神经管缺损的检出率为75外
(3/4),比国外报告的79-88务略低[1070
4.从13-40妊周的正常孕妇甲胎蛋白含
量的分布,以及异常孕妇中筛选的结果来看,我
们的免疫扩散放射自显影技术在定量测定孕妇
血中甲胎蛋白,以筛选胎儿神经管缺损方面是
可用的.
甲胎蛋白量(ng加1)
图2甲胎蛋白参考抗原的标准曲线
597,5拓
位数
讨论
虽然测定羊水中甲胎蛋白含量在产前诊断
胎儿神经管缺损时其准确率高达98多1111,但羊
膜穿刺掌握不好,对胎儿生命有一定危险性,不
宜普遍使用.为此,英国,美国在这方面做了不
少研究工作.例如,英国在近两万名孕妇中发
现有79-88呢的开放性神经管缺损妊娠,可在
16-18周内筛选出来〔103.我们这次调查人数
虽较少,但也可初步说明,测定母血甲胎蛋白
含量预测胎儿神经管缺损在我国也是完全适用
的.
但是,由于正常妊娠和异常妊娠的母血甲
胎蛋白含量在每一孕周内不但是分散的,而且
也是重叠的,因此,为了诊断异常妊娠,每个实
验室都必须首先确定一条适当的临界线(值),
作为判断异常妊娠的尺度.临界线如果定的过
高,将会有较多的神经管缺损的妊娠被遗漏;若
定的过低,则会有较多的正常妊娠被误诊.目
前国外有的采用母血甲胎蛋白正常值的95多
位数[161,有的采用98多位数141,有的采用正常中
位数值的2.5倍1107.我们则采用97.5%位数作
为临界线,其诊断效果都是相近的.
根据英国协作研究组的建议1307,产前诊断
胎)L神经管缺损的时间最好是在16-18妊周
检查母血甲胎蛋白的含量.这不仅是由于此时
检出率较高,而且更重要的是,在此时若发现阳
性结果时还可以施行人工引产.应该指出,侧
定母血甲胎蛋白含量只是一种筛选手段,并不
是一个确诊方法,因为母血甲胎蛋白含量高于
临界值的孕妇,并不都怀有神经管缺损的胎
儿E21.因为有少数正常妊娠,以及多胎妊娠,胎
死宫内,胎儿,母体出血,脐膨出或母亲患有
肝病时,母血甲胎蛋白含量有时会高于临界线.
因此,母血甲胎蛋白升高时还应配合其它的检
查方法(如超声波图及羊水中甲胎蛋白测定)方
能确诊.通过这样的筛选程序,可使98%以上
产前诊断神经管缺损妊娠的病人避免使用羊膜
穿刺,而且还能把包括神经管缺损在内的异常
妊娠检查出来,因此说,它是一种有临床实用价
值的检测手段.参考文献
[1]郑振群等:1978.中华医学杂志,(12): 7310
[2]郑振群:1978.医学参考资料,('):2620
「3]Brock. D. J. H. et al.:1973. Lancet, II:923.
[4]Crandall, B. F. et al.: 1978. Pediat. Clin. North.
Amer,19-. 981.
[5]Ferguson-SmithM.A. et al.:1978. Lancet, I:
1330.
[6 ] Leighton, P. C. et al.:1975. ibid., II:1012.
[7]Macri, N. J. et al.:1975. ibid., 11: 791.
[8]Milunsky, A. et al.:1980. Obstet Gynecol., 55:
60.
[9 ] Macri, N. J. et al.: 1980. Seminars in Perinato-
logy, 4:207.
[10] Report of U. K.:1977. Collaborative Study on
Alpha-fetoprotein in Relation to Neural-tube
Defects. Lancet, I:1232.
[ill Second Report of U. K.: 1979. ibid., 11: 651.
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产前筛选胎儿神经管缺损的免疫学方法''
郑振群顾素娟韩玉茹王玉英
(山西医学院生殖免疫研究室,太原)(北京市计划生育研究室)
根据许多国家统计指出,每5个死亡的婴
儿中就有1个是先天性畸形川.在所有出生的
婴儿中有畸形者高达6,其中以神经管缺损
(包括无脑儿,脊柱裂,脑膨出)〔们最为常见.神经
管缺损的发病率有地理差异,变化在1痴-7偏
之间,多数国家为2痴[4]o 1973年发现,神经管
缺损这类疾病,可利用免疫学方法(定量测定母
血甲胎蛋白的含量)在妊娠的第16-20周作出
诊断.妊娠早期引产,可避免畸形婴儿的出生.
这对家庭及国家都有好处.当前,我国号召每
对妇夫最好生一个孩子,因此,人们当然希望
自己生出一个健康的孩子.产前预测胎儿是否
患有神经管缺损,为健康孩子的出生提供了可
有旨.
正常孕妇血中甲胎蛋白含量一般在25-
400 ng/ml之间.测定如此低水平的甲胎蛋白,
国外普遍采用放射免疫测定法CIOI.但此法不仅
需要特殊设备,而且操作也很繁杂.目前,在我
国尚不能作为常规方法在医院普遍采用.我们
试用已经建立的免疫扩散放射自显影术Ci7测
定了母血甲胎蛋白含量获得满意结果,现报告
于下.
材料和方法
选择末次月经日期准确的孕妇作为检查对
象,这些孕妇的妊周为13-40周.妊周从末次
月经的第一天起,以整周计算.检查和随访病人
共计889例,均查阅病历及分娩记录,依无妊娠
合并症并出生健康单胎婴儿的母血甲胎蛋白含
量制定正常值范围.以国外多数实验室采用的
正常值的97.5位数作为判断正常及异常妊娠
的临界值.
每一孕妇自静脉采血2毫升,分出血清存
斗℃冰箱待检.一般在当日或次日进行测定.用
免疫扩散放射自显影法测定甲胎蛋白含量Ian
其方法简述如下:(1)先在6X10厘米玻片上涂
布一层2多的琼脂,在70℃烤箱中烤干;(2)将
甲胎蛋白单价抗血清(北京生物制品研究所出
售)按1:20,000加入已溶化并冷至560C的1外
的琼脂(用生理盐水配制)中,快速混匀,倾注在
上述处理过的玻片上,每片10毫升,待凝;(3)每
片打孔18个,孔径3毫米,孔距10毫米;(幼各
孔分别加人每毫升含有25,50,100,200,400,
800毫微克的标准甲胎蛋白的参考抗原和病人
血清,每孔15微升;(5)然后在各孔中分别加
碘标记的甲胎蛋白(中国科学院原子能研究所
供应)1微升(约6,000-12,000脉冲/分);(6)
放人湿润的密闭容器中,在37℃反应24小时,
取出后小心用水漂洗20分钟,70℃烤干;(7)
在暗室(箱)中,紧贴一张6X10厘米的X光胶
片,再盖一张同样大小的玻片,用皮筋扎紧,装
人黑纸袋中,曝光8-24小时(视同位素强度而
定);(8)按常法冲洗胶片,可见片上出现大小
不等的黑色反应扩散圈(图1); (9)先测量各
种标准参考抗原扩散圈的直径(毫米,纵座标)
和含量(毫微克/毫升,横座标),绘制标准曲线
图(图2); (10)然后分别测量病人血清的扩散
圈,查标准曲线,即可得知甲胎蛋白的含量.
本法对甲胎蛋白的最低可测量值为25ng/
MI,检测范围为25-800ng/ml,甲胎蛋白含量
大于800 ng/ml的样品应作适当的稀释.
Zheng Zhenqun et al.: Prenatal Diagnosis for Fetal
Neural-tube Defect by Immunological Metho!
1)本研究资料的统计处理由山西医学院卫生统计教研室
解宝鑫讲师协助,特此致谢.
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2.若以97.5务位数作为临界线,正常孕妇
血中甲胎蛋白含量应有97务以上分布在此值
的下面,超过此线者不能大于3 0%o.我们测定
的695名正常孕妇的结果正好符合这一要求.
从图3可以看出,有97.1多(675/695)分布在
临界值的下面,只有2.9多(20/695)超过这个
临界值.这与国外报告也是一致的[[4,6,7,10]n
1600 688
图1免疫扩散放射自显影
注:孔1一6为2 5-800 ng/ml标准参考抗原的扩
散圈,孔7和13为正常人血清(甲胎蛋白在25 ng/
ml以下),孔周为松散的黑影.孔10和11以及12为
妊YR 18周和32周母血及16周羊水(1:20)中甲胎
蛋白的扩散结果,其余孔均为肝病病人血清,其中16
及17孔甲胎蛋白已超过800 ng/ml,经稀释后(is
孔)才能测出.
患肝炎,肝硬化,肝癌时血中亦可出现甲胎蛋白.以
妊妇血中甲胎蛋白诊断神经管缺损时,应排除各种
肝病.
一三谕.}扭顺鉴叶翻甫
均数
妊周
图3 695例13-40妊周正常孕妇血中甲胎蛋白分
布及4例开放性神经管缺损(▲)的结果
户行三}毋祠运趣经,伯
实验结果
1.国外不少实验室所测定的孕妇血中甲胎
蛋白正常值分布范围都大致相同[4,6,7,101.从妊
娠的第12周开始高于正常非孕妇水平,随妊周
增加逐渐升高,至31-34周达高峰,以后又逐
渐下降.我们的结果亦与此相同(图3)0
3.在随访的孕妇中有4例分别生出4个无
脑儿,其中3例母血甲胎蛋白含量超过了临界
线(28周1例,1600 ng/ml; 33周1例356 ng/
ml; 37周1例688 ng/ml),还有1例的甲胎蛋
白在临界值的下面(36周162 ng/ml)系假阴性
结果.对开放性神经管缺损的检出率为75外
(3/4),比国外报告的79-88务略低[1070
4.从13-40妊周的正常孕妇甲胎蛋白含
量的分布,以及异常孕妇中筛选的结果来看,我
们的免疫扩散放射自显影技术在定量测定孕妇
血中甲胎蛋白,以筛选胎儿神经管缺损方面是
可用的.
甲胎蛋白量(ng加1)
图2甲胎蛋白参考抗原的标准曲线
597,5拓
位数
讨论
虽然测定羊水中甲胎蛋白含量在产前诊断
胎儿神经管缺损时其准确率高达98多1111,但羊
膜穿刺掌握不好,对胎儿生命有一定危险性,不
宜普遍使用.为此,英国,美国在这方面做了不
少研究工作.例如,英国在近两万名孕妇中发
现有79-88呢的开放性神经管缺损妊娠,可在
16-18周内筛选出来〔103.我们这次调查人数
虽较少,但也可初步说明,测定母血甲胎蛋白
含量预测胎儿神经管缺损在我国也是完全适用
的.
但是,由于正常妊娠和异常妊娠的母血甲
胎蛋白含量在每一孕周内不但是分散的,而且
也是重叠的,因此,为了诊断异常妊娠,每个实
验室都必须首先确定一条适当的临界线(值),
作为判断异常妊娠的尺度.临界线如果定的过
高,将会有较多的神经管缺损的妊娠被遗漏;若
定的过低,则会有较多的正常妊娠被误诊.目
前国外有的采用母血甲胎蛋白正常值的95多
位数[161,有的采用98多位数141,有的采用正常中
位数值的2.5倍1107.我们则采用97.5%位数作
为临界线,其诊断效果都是相近的.
根据英国协作研究组的建议1307,产前诊断
胎)L神经管缺损的时间最好是在16-18妊周
检查母血甲胎蛋白的含量.这不仅是由于此时
检出率较高,而且更重要的是,在此时若发现阳
性结果时还可以施行人工引产.应该指出,侧
定母血甲胎蛋白含量只是一种筛选手段,并不
是一个确诊方法,因为母血甲胎蛋白含量高于
临界值的孕妇,并不都怀有神经管缺损的胎
儿E21.因为有少数正常妊娠,以及多胎妊娠,胎
死宫内,胎儿,母体出血,脐膨出或母亲患有
肝病时,母血甲胎蛋白含量有时会高于临界线.
因此,母血甲胎蛋白升高时还应配合其它的检
查方法(如超声波图及羊水中甲胎蛋白测定)方
能确诊.通过这样的筛选程序,可使98%以上
产前诊断神经管缺损妊娠的病人避免使用羊膜
穿刺,而且还能把包括神经管缺损在内的异常
妊娠检查出来,因此说,它是一种有临床实用价
值的检测手段.参考文献
[1]郑振群等:1978.中华医学杂志,(12): 7310
[2]郑振群:1978.医学参考资料,('):2620
「3]Brock. D. J. H. et al.:1973. Lancet, II:923.
[4]Crandall, B. F. et al.: 1978. Pediat. Clin. North.
Amer,19-. 981.
[5]Ferguson-SmithM.A. et al.:1978. Lancet, I:
1330.
[6 ] Leighton, P. C. et al.:1975. ibid., II:1012.
[7]Macri, N. J. et al.:1975. ibid., 11: 791.
[8]Milunsky, A. et al.:1980. Obstet Gynecol., 55:
60.
[9 ] Macri, N. J. et al.: 1980. Seminars in Perinato-
logy, 4:207.
[10] Report of U. K.:1977. Collaborative Study on
Alpha-fetoprotein in Relation to Neural-tube
Defects. Lancet, I:1232.
[ill Second Report of U. K.: 1979. ibid., 11: 651.
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