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暑期实验室经验分享
中研院动物所吴金洌老师实验室
生科04
891608彭柏欣
实验室研究方向介绍
1.鱼类感染性胰脏坏死病毒(IPNV)的研究
2.选殖出吴郭鱼之类胰岛素生长因子 (IGF-I及IGF-II) 与生长激素三种基因之cDNA序列,基因体结构之分析,并利用E. coli表现出吴郭鱼之IGF-I,IGF-II与GH的基因重组胜.选殖出斑马鱼与黑鲷IGF-I cDNA序列与斑马鱼基因体结构之分析并在酵母菌中表现黑鲷IGF-I的基因重组胜.
3.研究鲤鱼适应环境温度的调节机制
关於指导我的学长—何国牟学长
1.做出四色萤光鱼
2.利用萤光鱼研究慢性肝炎
3.图片权属於学长,在此不附上,敬请见谅.
我的实验--毒性实验
目的:想观察不同化学物质对斑马鱼胚胎早期肝脏发育的影响,实验先使用野生型斑马鱼,分别以不同浓度之化学药品处理其授精48小时胚胎,以期可以测出对斑马鱼胚胎造成一定伤害,但不会立即致死的特定浓度,再使用绿色萤光蛋白质特定表现鱼肝脏之基因转殖斑马鱼,藉由其肝脏有绿色萤光标示,便於观察其确实有无对肝脏造成损害,希望可以观察到特定药物对斑马鱼产生急性肝损伤的情况.
使用药品
前後共计曾使用过DMSO,Alcohol,CCl4,carbamethapine,indomethacin(美洒辛) ,arsenic(砷) acid六种化学药品,处理斑马鱼胚胎.
分别以加入不同浓度药品的曝气水,饲养於塑胶六格盘.
这六种药物都被怀疑有轻重不一的肝毒性.
DMSO,Alcohol
使用最高浓度4%,虽部分鱼体外观有畸形现象,但并未产生可能为肝损伤导致的明显表徵,例如:水肿,疑似肝部位出血,故未进行到使用转基因鱼实验部分.
CCl4
使用浓度:3λ(0.03%),4λ(0.04%) .
对象:授精48小时斑马鱼胚胎.
观察:在持续药物处理都出现严重的水肿,及程度不一的内出血现象,但此损害现象非直接和化学药品浓度成正比,在2λ处理组中,中毒现象并不明显,且缓慢许多,在浓度2λ以下处理相同时间甚至看不出任何损伤.
怀疑一定浓度下CCl4可能腐蚀六格盘,溶解出未知有害物质,在进一步使用转基因鱼实验中,改用玻璃培养皿操作,一组为转基因鱼,使用3.5λCCl4处理,另一组为野生型,使用4λCCl4处理.
CCl4
4λCCl4组明显水肿及死亡的进展速度较3.5λ组快,相较於之前以六格盘同浓度组比较,中毒表徵及死亡速度进展较不严重且较缓慢,故先前考虑之CCl4腐蚀六格盘并溶解出未知有害物质,确有影响本实验结果.
在以3.5λCCl4处理转基因鱼2天後,挑出肝脏有发光之幼鱼,原先以一般光学显微镜观察有疑似中毒表徵(如水肿,躯体发育畸形)的个体,经挑选後全部皆为不发萤光,剩下肝部有发萤光的个体,肝脏未出现明显损伤且外观正常.
CCl4
处理9天後以萤光显微镜观察,肝部仍未出现明显损伤,虽然其外观已不健康有些水肿,出血,活动力不佳,多平躺状态,且死亡过半;可能因为未达CCl4造成急性肝损伤浓度,或因处理时间不够长,而鱼已经体弱无法顺利进食,饥饿而死.
後经林立元老师提醒,才知CCl4对部分塑胶 (PC)有腐蚀性.
Carbamethapine,Indomethacin,
Arsenic acid
使用浓度:0.25λ(25μM),0.125λ(12.5μM),0.0625λ(6.25μM)各两盘.
对象:授精48小时野生型斑马鱼胚胎.
观察:其中indomethacin表态不正常及死亡情况最为严重,其次为arsenic acid ,carbamethapine,以一般光学显微镜观察可见其肝脏部位较未处理的鱼不透明,有些肿大,推测可能对肝脏造成伤害,故改使用转基因鱼.
Carbamethapine,Indomethacin,
Arsenic acid
使用浓度:0.25λ的carbamethapine,indomethacin,arsenic acid.
对象:转基因萤光斑马鱼48pfd
观察:经过加药处理6天後,开始出现死亡,14天後,以萤光显微镜观察尚存活的小鱼,其肝脏部分仍正常发光,无明显的损伤.本次毒性实验萤光部分缺少持续拍照,及对照组的比较,纪录不够完整,持续,我想这是这次毒性实验对肝损伤无明显发现的因素之一,是往後操作实验我应注意的地方.
检讨
本次毒性实验萤光部分缺少持续拍照,及对照组的比较,纪录不够完整,持续,我想这是这次毒性实验对肝损伤无明显发现的因素之一,是往後操作实验我应注意的地方.
实验中断
进入杂工生活 意外的收获
做些简单的分生实验,enzyme digestion 、 ligation 、 蓝白挑 、mini-preparation等.
养鱼度日
餵鱼
产卵
换水
筛选
心得
我觉得这间实验室的人都很有趣,实验室的气氛很好,对我们这些暑期生也很和善.
有问题就问,只要他们有空,都会很仔细教你.
以後做实验要更用心些.
谢谢大家
30596
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中研院动物所吴金洌老师实验室
生科04
891608彭柏欣
实验室研究方向介绍
1.鱼类感染性胰脏坏死病毒(IPNV)的研究
2.选殖出吴郭鱼之类胰岛素生长因子 (IGF-I及IGF-II) 与生长激素三种基因之cDNA序列,基因体结构之分析,并利用E. coli表现出吴郭鱼之IGF-I,IGF-II与GH的基因重组胜.选殖出斑马鱼与黑鲷IGF-I cDNA序列与斑马鱼基因体结构之分析并在酵母菌中表现黑鲷IGF-I的基因重组胜.
3.研究鲤鱼适应环境温度的调节机制
关於指导我的学长—何国牟学长
1.做出四色萤光鱼
2.利用萤光鱼研究慢性肝炎
3.图片权属於学长,在此不附上,敬请见谅.
我的实验--毒性实验
目的:想观察不同化学物质对斑马鱼胚胎早期肝脏发育的影响,实验先使用野生型斑马鱼,分别以不同浓度之化学药品处理其授精48小时胚胎,以期可以测出对斑马鱼胚胎造成一定伤害,但不会立即致死的特定浓度,再使用绿色萤光蛋白质特定表现鱼肝脏之基因转殖斑马鱼,藉由其肝脏有绿色萤光标示,便於观察其确实有无对肝脏造成损害,希望可以观察到特定药物对斑马鱼产生急性肝损伤的情况.
使用药品
前後共计曾使用过DMSO,Alcohol,CCl4,carbamethapine,indomethacin(美洒辛) ,arsenic(砷) acid六种化学药品,处理斑马鱼胚胎.
分别以加入不同浓度药品的曝气水,饲养於塑胶六格盘.
这六种药物都被怀疑有轻重不一的肝毒性.
DMSO,Alcohol
使用最高浓度4%,虽部分鱼体外观有畸形现象,但并未产生可能为肝损伤导致的明显表徵,例如:水肿,疑似肝部位出血,故未进行到使用转基因鱼实验部分.
CCl4
使用浓度:3λ(0.03%),4λ(0.04%) .
对象:授精48小时斑马鱼胚胎.
观察:在持续药物处理都出现严重的水肿,及程度不一的内出血现象,但此损害现象非直接和化学药品浓度成正比,在2λ处理组中,中毒现象并不明显,且缓慢许多,在浓度2λ以下处理相同时间甚至看不出任何损伤.
怀疑一定浓度下CCl4可能腐蚀六格盘,溶解出未知有害物质,在进一步使用转基因鱼实验中,改用玻璃培养皿操作,一组为转基因鱼,使用3.5λCCl4处理,另一组为野生型,使用4λCCl4处理.
CCl4
4λCCl4组明显水肿及死亡的进展速度较3.5λ组快,相较於之前以六格盘同浓度组比较,中毒表徵及死亡速度进展较不严重且较缓慢,故先前考虑之CCl4腐蚀六格盘并溶解出未知有害物质,确有影响本实验结果.
在以3.5λCCl4处理转基因鱼2天後,挑出肝脏有发光之幼鱼,原先以一般光学显微镜观察有疑似中毒表徵(如水肿,躯体发育畸形)的个体,经挑选後全部皆为不发萤光,剩下肝部有发萤光的个体,肝脏未出现明显损伤且外观正常.
CCl4
处理9天後以萤光显微镜观察,肝部仍未出现明显损伤,虽然其外观已不健康有些水肿,出血,活动力不佳,多平躺状态,且死亡过半;可能因为未达CCl4造成急性肝损伤浓度,或因处理时间不够长,而鱼已经体弱无法顺利进食,饥饿而死.
後经林立元老师提醒,才知CCl4对部分塑胶 (PC)有腐蚀性.
Carbamethapine,Indomethacin,
Arsenic acid
使用浓度:0.25λ(25μM),0.125λ(12.5μM),0.0625λ(6.25μM)各两盘.
对象:授精48小时野生型斑马鱼胚胎.
观察:其中indomethacin表态不正常及死亡情况最为严重,其次为arsenic acid ,carbamethapine,以一般光学显微镜观察可见其肝脏部位较未处理的鱼不透明,有些肿大,推测可能对肝脏造成伤害,故改使用转基因鱼.
Carbamethapine,Indomethacin,
Arsenic acid
使用浓度:0.25λ的carbamethapine,indomethacin,arsenic acid.
对象:转基因萤光斑马鱼48pfd
观察:经过加药处理6天後,开始出现死亡,14天後,以萤光显微镜观察尚存活的小鱼,其肝脏部分仍正常发光,无明显的损伤.本次毒性实验萤光部分缺少持续拍照,及对照组的比较,纪录不够完整,持续,我想这是这次毒性实验对肝损伤无明显发现的因素之一,是往後操作实验我应注意的地方.
检讨
本次毒性实验萤光部分缺少持续拍照,及对照组的比较,纪录不够完整,持续,我想这是这次毒性实验对肝损伤无明显发现的因素之一,是往後操作实验我应注意的地方.
实验中断
进入杂工生活 意外的收获
做些简单的分生实验,enzyme digestion 、 ligation 、 蓝白挑 、mini-preparation等.
养鱼度日
餵鱼
产卵
换水
筛选
心得
我觉得这间实验室的人都很有趣,实验室的气氛很好,对我们这些暑期生也很和善.
有问题就问,只要他们有空,都会很仔细教你.
以後做实验要更用心些.
谢谢大家
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