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猪乙型脑炎病毒病一步法RT-PCR诊断试剂盒说明书猪乙型脑炎病毒病一步法RT-PCR诊断试剂盒说明书
[注意] 用前请认真阅读注意事项.
[用途] 用于猪乙型脑炎病毒病的检测,诊断和流行病学调查.
[试剂]
编号
数量
保存
SR-I
13ml
4℃
SR-II
9ml
4℃
TU-1
110ul
-20℃
TU-2
85ul
-20℃
TU-3
170ul
-20℃
TU-4
20ul
-20℃
TU-5
20ul
-20℃
TU-6
20ul
-20℃
TU-7
25ul
-20℃
TU-8
25ul
-20℃
TU-9
1ml
-20℃
TU-10.
80ul
4℃
TU-11.
35ul
4℃
TU-12
30ul
4℃
[操作步骤]
1. RNA提取
(1)取疑似猪乙型脑炎病毒病的病料(脑,肺脏,脾脏等)1~4g于无菌研钵,研磨并用Hanks液(pH7.2~7.4)稀释成1:4乳剂,分装1.5ml灭菌EP管,反复冻融2~3次,8000r/min离心5分钟.
(2)取300ul上清液,移入新的1.5ml灭菌EP管中,加入600ulSR-I,反复颠倒几次混匀,室温放置5~10分钟..
(3)加入180ul氯仿,漩涡振荡15秒混匀.室温下放置2~3分钟.
(4)12000r/min离心10分钟,取450ul上层水相,转移到一个新的EP管中,再加入500ul异丙醇混匀,室温放置10分钟.
(5)12000r/min离心10分钟,弃去上清,加入SR-II 700ul,充分洗涤沉淀RNA后,12000r/min离心5分钟,小心吸去上清(注意:严格防止RNA丢失).
(6)室温晾干或到置于超净工作台内风干,15-30分钟.用30ulTU-9溶解(难于溶解时,可56℃水浴15分钟),即为模板,即用或-70℃冻存备用.
2.One-Step RT- PCR加样体系
TU-1
5ul
TU-2
4ul
TU-3
8ul
TU-4
1ul(现用现取,用完后立即放回)
TU-5
1ul(现用现取,用完后立即放回)
TU-6
1ul(现用现取,用完后立即放回)
TU-7
1ul
TU-8
1ul
TU-9
15ul
模板
13ul
3.反应程序:
50℃
45min
94℃预变性
5min
94℃变性
60s
55℃退火
60s 30个循环
72℃延伸
60s
72℃延伸
10min
4.电泳:
称量0.25g琼脂糖,放入锥形瓶,加入25ml 1×TAE液(可配置50×浓缩液,储存备用),于微波炉中熔解,加入1.5ul的TU-12混匀.封闭好电泳槽,加入梳子,倒入琼脂凝胶,待凝固后,将PCR产物8ul混合1.5ul TU-11,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加2ulTU-10,在100v 电压下,1×TAE液中电泳30分钟,在紫外成像仪下观察结果.
[结果判定]
在约495bp位置出现扩增带,实验结果为阳性
[注意事项]
1.每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底.
2.本试剂盒为20头份量诊断试剂,操作失误或移液器不准确造成最终剂量不够情况,不予负责.
3.所有试剂在要求温度下保存,-20℃保存试剂尽量减少反复冻融,使用后的试剂立即放回,避免在室温搁置太久.
4.尽量建立PCR试验操作区,避免交叉污染,RNA抽提严格防止RNA酶污染,要求戴一次性塑料手套,并经常更换.
5.加样和反应程序严格按照说明书进行,由于操作失误,移液器不精确,定时不准确造成无结果情况,不予负责.
6. 吸头,离心管和PCR管在使用前,最好用DEPC水(0.1%)处理,然后高压灭菌后烘干,操作过程尽量不要用手接触,可用镊子夹取.
7.注意防止试剂污染,在有效期限前用完.
8. TU-10所装试剂为致癌物质,避免接触到皮肤.如若不甚接触,请立即用洗涤剂清洗.
[有效期]
本制品有效期为1年,生产日期见包装侧面
序号
产 品 名 称
包 装 规 格
价 格
1
猪伪狂犬病PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
2
猪细小病毒病PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
3
猪圆环病毒病PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
4
鸡减蛋综合症PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
5
小鹅瘟病毒病PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
6
犬细小病毒病PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
7
猪瘟RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
8
猪蓝耳病RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
9
高致病性猪蓝耳病RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
10
鸡传染性支气管炎RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
11
犬瘟热病RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
12
兔瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
13
猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
14
猪乙型脑炎病毒病RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
15
猪放线杆菌胸膜肺炎和副猪嗜血杆菌多重PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
16
细小病毒和圆环病毒多重PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
17
细小病毒和伪狂犬病毒多重PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
18
圆环病毒和伪狂犬病毒多重PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
391406
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[注意] 用前请认真阅读注意事项.
[用途] 用于猪乙型脑炎病毒病的检测,诊断和流行病学调查.
[试剂]
编号
数量
保存
SR-I
13ml
4℃
SR-II
9ml
4℃
TU-1
110ul
-20℃
TU-2
85ul
-20℃
TU-3
170ul
-20℃
TU-4
20ul
-20℃
TU-5
20ul
-20℃
TU-6
20ul
-20℃
TU-7
25ul
-20℃
TU-8
25ul
-20℃
TU-9
1ml
-20℃
TU-10.
80ul
4℃
TU-11.
35ul
4℃
TU-12
30ul
4℃
[操作步骤]
1. RNA提取
(1)取疑似猪乙型脑炎病毒病的病料(脑,肺脏,脾脏等)1~4g于无菌研钵,研磨并用Hanks液(pH7.2~7.4)稀释成1:4乳剂,分装1.5ml灭菌EP管,反复冻融2~3次,8000r/min离心5分钟.
(2)取300ul上清液,移入新的1.5ml灭菌EP管中,加入600ulSR-I,反复颠倒几次混匀,室温放置5~10分钟..
(3)加入180ul氯仿,漩涡振荡15秒混匀.室温下放置2~3分钟.
(4)12000r/min离心10分钟,取450ul上层水相,转移到一个新的EP管中,再加入500ul异丙醇混匀,室温放置10分钟.
(5)12000r/min离心10分钟,弃去上清,加入SR-II 700ul,充分洗涤沉淀RNA后,12000r/min离心5分钟,小心吸去上清(注意:严格防止RNA丢失).
(6)室温晾干或到置于超净工作台内风干,15-30分钟.用30ulTU-9溶解(难于溶解时,可56℃水浴15分钟),即为模板,即用或-70℃冻存备用.
2.One-Step RT- PCR加样体系
TU-1
5ul
TU-2
4ul
TU-3
8ul
TU-4
1ul(现用现取,用完后立即放回)
TU-5
1ul(现用现取,用完后立即放回)
TU-6
1ul(现用现取,用完后立即放回)
TU-7
1ul
TU-8
1ul
TU-9
15ul
模板
13ul
3.反应程序:
50℃
45min
94℃预变性
5min
94℃变性
60s
55℃退火
60s 30个循环
72℃延伸
60s
72℃延伸
10min
4.电泳:
称量0.25g琼脂糖,放入锥形瓶,加入25ml 1×TAE液(可配置50×浓缩液,储存备用),于微波炉中熔解,加入1.5ul的TU-12混匀.封闭好电泳槽,加入梳子,倒入琼脂凝胶,待凝固后,将PCR产物8ul混合1.5ul TU-11,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加2ulTU-10,在100v 电压下,1×TAE液中电泳30分钟,在紫外成像仪下观察结果.
[结果判定]
在约495bp位置出现扩增带,实验结果为阳性
[注意事项]
1.每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底.
2.本试剂盒为20头份量诊断试剂,操作失误或移液器不准确造成最终剂量不够情况,不予负责.
3.所有试剂在要求温度下保存,-20℃保存试剂尽量减少反复冻融,使用后的试剂立即放回,避免在室温搁置太久.
4.尽量建立PCR试验操作区,避免交叉污染,RNA抽提严格防止RNA酶污染,要求戴一次性塑料手套,并经常更换.
5.加样和反应程序严格按照说明书进行,由于操作失误,移液器不精确,定时不准确造成无结果情况,不予负责.
6. 吸头,离心管和PCR管在使用前,最好用DEPC水(0.1%)处理,然后高压灭菌后烘干,操作过程尽量不要用手接触,可用镊子夹取.
7.注意防止试剂污染,在有效期限前用完.
8. TU-10所装试剂为致癌物质,避免接触到皮肤.如若不甚接触,请立即用洗涤剂清洗.
[有效期]
本制品有效期为1年,生产日期见包装侧面
序号
产 品 名 称
包 装 规 格
价 格
1
猪伪狂犬病PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
2
猪细小病毒病PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
3
猪圆环病毒病PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
4
鸡减蛋综合症PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
5
小鹅瘟病毒病PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
6
犬细小病毒病PCR诊断试剂盒
20头份/盒
700元/盒
7
猪瘟RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
8
猪蓝耳病RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
9
高致病性猪蓝耳病RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
10
鸡传染性支气管炎RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
11
犬瘟热病RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
12
兔瘟病毒RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
13
猪传染性胃肠炎病毒RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
14
猪乙型脑炎病毒病RT-PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
15
猪放线杆菌胸膜肺炎和副猪嗜血杆菌多重PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
16
细小病毒和圆环病毒多重PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
17
细小病毒和伪狂犬病毒多重PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
18
圆环病毒和伪狂犬病毒多重PCR诊断试剂盒
20头份/盒
1200元/盒
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