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甲型肝炎灭活疫苗免疫原性的猴体实验甲型肝炎灭活疫苗免疫原性的猴体实验
李成明 陈江婷X 万宗举 崔俊生3 练幼辉XX 尹红章 赵 伟3 黄小芩33 王 祥33 陈统球33
尹卫东3 (中国药品生物制品检定所,北京100050)
摘 要 甲型肝炎病毒TZ84毒株经2BS二倍体细胞培养制备成甲型肝炎灭活疫苗.采用普通狨猴和恒河猴
进行疫苗的保护性研究.结果均有较好的抗体反应,而且对甲型肝炎病毒鲁兴株(强毒株)的攻击亦均有保护作
用.表明该疫苗有较好的免疫效果.
关键词 甲型肝炎灭活疫苗 普通狨猴 恒河猴
Experimental Study on Immunogenicity of Inactivated Hepatitis A Vaccine in
Monkeys
Li Chengming, Chen Jiangting , Wan Zongju et al(NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticaland
BiologicalProducts,Beijing100050)
Abstract Inactivated hepatitis A(HA)vaccine was prepared by culturing the strain TZ84 of HA virus in
2BS cells , and the immunogencity of it was studied in common marmosets and Macaca mulattas. The result
showed that good antibody respones were induced in the 2 kinds of monkeys. The vaccine could also protect the
monkeys from the challenge with strong virus strain(Luxing). It indicated that the inactivated HA vaccine had
good immunological effect .
Key words Inactivated hepatitis A vaccine Common marmoset Macaca mulatta
甲型肝炎灭活疫苗的免疫效果在国际上已得到
公认[ 1～3 ].日本森次保雄等用狨猴感染甲型肝炎病
毒,建立了理想的甲型肝炎动物模型.Korzaya等用
猕猴属类(Macaca)建立起甲型肝炎动物模型.国内
毛江森等用红面猴作为甲型肝炎病毒的敏感动
物[ 4 ,5 ].练幼辉等用恒河猴(Macaca Mulatta)和普通
狨猴(Common Marmoset)进行了甲型肝炎动物模型
的对比研究,证实普通狨猴从肝脏病理反应,甲肝抗
体和肝功能改变等方面比恒河猴明显.因此,选择
普通狨猴和恒河猴作为实验动物进行甲型肝炎灭活
疫苗的研究.现将结果报告如下.
材料与方法
11甲型肝炎灭活疫苗
甲型肝炎病毒TZ84毒株第30代,在人胚肺二
倍体细胞2BS株上大量培养后,经过PEG处理,分
子筛和超滤提纯,用1:4000甲醛灭活,经定量测定,
甲肝病毒抗原含量为1000 UPml ,制成含110 mgPml
氢氧化铝吸附甲型肝炎灭活疫苗,分装量为110 mlP
支,4℃保存.
21甲型肝炎病毒野毒株
211 TZ84毒株:用人胚肺二倍体细胞2BS株
连续传3代后,冻融收获,20 000 rPmin超离心收集
甲肝病毒,抗原定量为1500 UPml.
212 鲁兴株:中国医学科学院医学生物学研究
所,收集甲型肝炎病人急性期粪便制备,经生物学证
实含有甲型肝炎病毒,可作为甲型肝炎病毒攻击用
野毒株[ 6 ].
31实验动物
311 普通狨猴:由天津医科大学实验动物中心
从澳大利亚引进种猴繁殖之子代,年龄1～3岁,体
重250～400 g ,接种前测定抗2HAV阴性,肝功能及
122 中国生物制品学杂志1999年第12卷第4期 Chin J Biologicals 1999 ,Vo1. 12. No . 4
X
XX中国医学科学院医学生物学研究所
唐山怡安生物工程有限公司
1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
肝脏组织活检正常.
312 恒河猴:系中国医学科学院医学生物学研
究所实验动物中心提供,年龄1～2岁,体重115～2
kg ,接种前抗2HAV阴性,血清ALT和肝组织活检正
常.
41接种方法及剂量
疫苗采用肌内注射,每只110 ml.接种后28 d ,
用野毒株攻击,静脉注射,每只110 ml.
51标本的采集
511 血清:接种前后和攻击后每周空腹时采血
1次,第8 W后每两周采血1次,室温放置过夜,第2
d分离血清.
512 肝组织活检:接种前后每月肝穿活检1
次.4个月后将猴处死,取肝脏,心脏,肺脏,胃,十
二指肠,肾脏和肠系膜淋巴结等进行肝组织病理检
查.
513 采便:攻击后第2 d起每天收集大便1次,
连续收集1个月,以后每周收集1次,收集1个月,
置- 20℃保存,备检.
61检测方法
611 甲肝病毒抗原定量检测:用唐山怡安生物
工程有限公司生产的EIA甲肝抗原定量检测试剂盒
检测.根据甲肝抗原参比品作标准曲线,样品抗原
含量用平行线定量法计算,以UPml表示.
612 抗2HAV IgM :用唐山怡安生物工程有限公
司生产的抗2HAV IgM EIA试剂盒检测.
613 抗2HAV :用唐山怡安生物工程有限公司
生产的抗2HAV EIA试剂盒检测.根据WHO甲肝抗
体标准品作标准曲线,样品抗体效价用平行线定量
法计算,以mIUPml表示.
614 ALT:采用EncoreⅡ型自动生化分析仪.
615 ICD :采用生化分析法.
616 猴粪便甲肝病毒测定:用PBS将猴便制成
20 %的大便悬液, - 70℃冻融3次,10 000 rPmin离心
30 min.取上清1:10稀释,接种2BS细胞,盲传两
代,冻融收获后,采用EIA方法进行甲肝抗原测定.
617 肝组织病理:参照Krawezymski ,1981肝脏
病变分度方法.
71实验分组
711 免疫组:2只普通狨猴,4只恒河猴分别接
种甲型肝炎灭活疫苗1支.
712 加强免疫组:普通狨猴和恒河猴接种甲型
肝炎灭活疫苗1支.4 W时,其中1只普通狨猴和1
只恒河猴分别加强接种1次.
713 保护实验组:普通狨猴和恒河猴接种甲型
肝炎灭活疫苗1支.4 W时,其中1只普通狨猴和2
只恒河猴分别用鲁兴株(20 %大便悬液110 mlP只)
进行攻击.
714 对照组:鲁兴株直接攻击2只普通猴猴和
2只恒河猴.
715 病毒感染组: TZ84毒株第3代感染2只普
通狨猴和3只恒河猴.
结果
11普通狨猴的免疫反应
甲型肝炎灭活疫苗接种2只普通狨猴后第2W
出现抗2HAV阳转,至第4W抗体滴度已达625～
2500 mIUPml.抗2HAV IgM于接种后2～3W阳转,最
高滴度1:1000 ,抗2HAV IgM持续5～10W转阴.
ALT无异常升高现象.肝活检未见病理改变.
4W后,1只狨猴再接种甲型肝炎灭活疫苗1
支;另对1只狨猴用甲型肝炎病毒野毒鲁兴株攻击.
结果2只普通狨猴均出现抗HAV峰值反应,攻击或
加强免疫后第2W抗2HAV达到10000 mIUPml ,持续
4W ,降至2500 mIUPml ,ALT无异常升高.攻击或加
强免疫后肝活检未见病理改变.见图1和图2.攻
击后的普通狨猴大便未见甲肝病毒排出.
图1 普通狨猴的甲型肝炎灭活疫苗免疫反应
Fig 1. Antibody response of common marmosets to inac2
tivated hepatitis A vaccine
21恒河猴的免疫反应
甲型肝炎灭活疫苗接种4只恒河猴第2W后出
现抗2HAV阳转,至第4W抗体滴度已达625～2500
mIUPml ,抗2HAV IgM于接种后2～3W阳转,最高滴
度1:1000 ,抗2HAV IgM持续1～3W后转阴.ALT无
异常无高现象.肝活检未见病理改变.
222 中国生物制品学杂志1999年第12卷第4期 Chin J Biologicals 1999 ,Vo1. 12. No . 4
1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
图2 甲肝病毒野毒攻击甲肝灭活疫苗免疫狨猴肝组
织切片
Fig 2. Section of liver tissue of immunized marmostes af2
ter being chall enged with hepatitis A wild virus
4W后,其中1只恒河猴加强免疫1次,结果出现抗2
HAV反应峰,加强后第2W抗2HAV达到40 000 mIUP
ml ,持续4W后降至10 000 mIUPml ,ALT无异常升高
现象且未见肝脏病理改变.
4W后,另2只用鲁兴株攻击,结果抗2HAV增长
4倍,攻击后第2W抗2HAV效价达到10 000 mIUPml ,
2W后开始下降,保持在2 500 mIUPml.见图3.攻
击后的恒河猴ALT无异常升高现象,肝活检未见病
理改变,大便未见甲肝病毒排出.
31野毒感染普通狨猴和恒河猴的反应
甲型肝炎病毒鲁兴株大便悬液接种2只普通狨
猴后,1只第3W出现抗2HAV阳转,至第12W抗体
滴度已达1:16 384 ,抗2HAV IgM于接种后第2W出
现阳性,滴度为1:20 000.一直持续到第10W ,12W
时略有下降,为1:10 000.ALT未见异常反应.肝
活检在第6W开始出现肝脏组织学病理改变.大便
悬液检测7～26 d排毒.另1只狨猴第4W抗2
HAV阳转,第12 W抗体滴度为1:64.肝活检在第
10W开始出现肝脏组织学病理改变.大便悬液检测
6～22 d排出甲型肝炎病毒.
甲型肝炎病毒鲁兴株大便液接种恒河猴后,第
2W出现抗2HAV阳转,一直保持在较低水平.至第
8W抗体效价达到156～625 mIUPml ,抗2HAV IgM一
直未阳转.ALT未见异常反应.肝活检未见肝脏组
织学病理改变,9～15 d大便排出甲型肝炎病毒.见
表1,图4.
图3 甲型肝炎灭活免疫恒河猴的反应
Fig 3. Antibody response of macaca Mulatta to inacti2
vated hepatitis A vaccine
图4 甲肝病野毒(鲁兴株)攻击狨猴的肝组织切片
Fig 4. Section of liver tissue of immunized marmosts af2
ter being challenged with strain Luxing of hepatitis A virus
表1 甲型肝炎病毒鲁兴株感染普通狨猴和恒河猴的反应
Table 1. Reactions of common marmoset and macaca mulatta infected with strain Luxing of hepatitis A virus
No.appear when AntibodyThe highest antibody titerAnti2HAV IgMLiver pathologyHAV in feces
Cm131:16 384> 1:20 000+ ++
Cm241:64> 1:20 000+ ++
Mm12625mIUPml--+
Mm22156mIUPml--+
41TZ84毒株第3代感染普通狨猴的反应
甲型肝炎病毒TZ84株第3代接种2只普通狨
猴后2W出现抗2HAV阳转,至第4W抗体效价已达
2 500 mIUPml ,最高到10 000 mIUPml ,持续2W ,然后
保持在2 500 mIUPml水平.抗2HAV IgM于接种后第
2W出现阳转,滴度为1:1 000 ,第4W时最高为
322 中国生物制品学杂志1999年第12卷第4期 Chin J Biologicals 1999 ,Vo1. 12. No . 4
1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
1:5 000 ,第6～8W消失.1只狨猴ALT在第4～6W
时略有升高,以后趋于正常.肝穿活检未见病理改
变.大便悬液检测3～20 d排出甲肝病毒.
51TZ84毒株第3代感染恒河猴的反应
甲型肝炎病毒TZ84毒株第3代接种3只恒河
猴后第2W出现抗2HAV阳转,至第4W抗体效价已
达625～2 500 mIUPml ,最高达到2 500～10 000 mIUP
ml ,持续6～8W.然后开始下降,保持在2 500～10
000 mIUPml水平.抗2HAV IgM于接种后第2W出现
阳性,滴度为1:1000 ,第4W时最高为1:5000～
25000 ,第10W时全部阴转,1只恒河猴ALT在第1～
2W时略有升高,以后趋于正常.肝穿活检未见病
理改变.大便悬液检测9～15 d排出甲肝病毒.
讨论
甲型肝炎病毒TZ84毒株在2BS细胞传代至第
3代,在普通狨猴和恒河猴体内没有肝脏病理改变,
只有一过性ALT和ICD变化.说明甲型肝炎病毒
TZ84毒株第3代致病性已经略有减弱,用于灭活疫
苗的生产更为安全可靠.
普通狨猴对甲型肝炎病毒鲁兴株攻击有明显的
肝脏病理改变,2只狨猴甲肝抗体滴度分别为1:64
和1:16348 ,ALT和ICD均有升高,肝脏组织学病理
也有改变证实甲型肝炎病毒鲁兴株有致病性,可作
为甲型肝炎病毒野毒攻击使用.
国内对普通狨猴的研究较少.该猴种体重轻,
饲养条件严格,价格昂贵,其ALT,ICD的参考范围
尚不能十分准确确定.恒河猴来源容易,饲养简单,
价格便宜,与人类免疫反应类似.猴体实验研究结
果表明:普通狨猴与恒河猴甲肝抗体水平基本一致,
但肝脏病理反应比恒河猴敏感.因此,在进行甲肝
灭活疫苗免疫原性实验时,选择普通狨猴和恒河猴
同时进行,相互弥补较为适宜.
参考文献
1 Wiedermann G , Ambrosch F , Andre FE , et al . Persistence of vaccine2
induced antibody to hepatitis A virus1Vaccine , 1992 ,10(suppl1):12921
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cine : Reactogenicity , immunogenicity and long2term antibody presis2
tence . J Med Virol . 1994 ,44 :44621
3 Tilzey AJ , plamer SJ , Barrow S , et al . Effect of hepatits A vaccination
schedules on immune respones. Vaccine , 1992 ,10(suppl):1212
4 Mao J S , Xie RY , Huang HY , et al . Studies in monkey of attenuated
hepatitis A varinants. Sci . Sin(B), 1998 ,31 :3382
5 Mal J S , Dong DX , Zhang HY , et al . Primary study of attenuated live
hepatitis A vaccine(H2strain)in humans. J Infect Dis , 1998 ,159 :6212
(1998209228收稿,1998210227修回)
(上接209页)
专家片岗哲朗认为卡介菌纯核酸是免疫增强剂的有
效成分并具有抗肿瘤的活性[ 10 ],他将卡介菌纯核酸
加上一定的佐剂后,其免疫增强剂及抗肿瘤活性明
显增强,而BCG2PSN中多糖是否也起上述作用还有
待进一步研究.
参考文献
1 湖南省死卡防治慢支协作组.死卡防治慢性支气管炎,感冒和流
感的临床和实验研究.中华内科杂志,1976 ,15 :286 - 289.
2 王慧,钟光明,梁英锐等.卡介菌多糖核酸及其对感冒的防治作
用.中华结核和呼吸杂志,1989 ,12(1):20～23.
3 陈一舫,王慧,等.卡介菌多糖核酸对小鼠巨噬细胞的激活作用.
湖南医学院学报,1988 ,13(2):117～120.
4 孙利军,王慧,谭礼智.卡介菌多糖核酸对ConA诱生IL22的实验
研究,湖南医科大学学报,1992 ,17(3):213 - 215.
5 赵伟强,王慧,谭礼智.卡介菌多糖核酸对干扰素的诱生和促诱生
活性.湖南医科大学学报,1990 ,15(1):34～37.
6 谭礼智,陈清兰,熊德坤,等.卡介菌多糖核酸对哮喘防治的实验
和临床研究.湖南医科大学学报,1991 ,16(1):77 - 80.
7 林恩尧.卡介菌提取物调节慢性支气管炎免疫功能效果的观察.
中华结核和呼吸系统疾病杂志,1987 ,10(1):41.
8 卡介菌多糖核酸治疗肺结核协作组.卡介菌多糖核糖联用6月短
程化疗治疗肺结核.湖南医科大学学报,1992 ,17(3):255～258.
9 《中国生物制品规程》一部.(试行)1995版,16 - 18.
10 Tohru T. Hiroshi Y ,Shizuo S , Yet al . Antitumor activity of DNA fraction
from mycobacterium bovis BCG 1 , Isolation , physicochemical charac2
terrization and antitumor activity JNCL ,1984 ,72(4):1 - 8.
11 晏子厚,杨永芳,马明清,等.治疗用卡介苗的研制.微生物免疫
学进展,1998 ,26(1):19 - 22.
12 Gurrie GA , Gurrie CA , Eccles SA. Serum Iysozyme as a marker of host
resistance . BJ Cancer ,1976 ,33 :51 - 59.
13 Byron NA , Caballero F , Campell M , et al . T2Cell Depletion & in vitro
thymosin inducibility in asthmatic children. Clin Exp Immunol ,1978 ,31 :
490 - 497.
14 Grang JM. Immunotherapy of tuberculosis. Tubercle , 1990 , 71 : 237 -
239.
(1998209223收稿,1999204222修回)
422 中国生物制品学杂志1999年第12卷第4期 Chin J Biologicals 1999 ,Vo1. 12. No . 4
1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
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李成明 陈江婷X 万宗举 崔俊生3 练幼辉XX 尹红章 赵 伟3 黄小芩33 王 祥33 陈统球33
尹卫东3 (中国药品生物制品检定所,北京100050)
摘 要 甲型肝炎病毒TZ84毒株经2BS二倍体细胞培养制备成甲型肝炎灭活疫苗.采用普通狨猴和恒河猴
进行疫苗的保护性研究.结果均有较好的抗体反应,而且对甲型肝炎病毒鲁兴株(强毒株)的攻击亦均有保护作
用.表明该疫苗有较好的免疫效果.
关键词 甲型肝炎灭活疫苗 普通狨猴 恒河猴
Experimental Study on Immunogenicity of Inactivated Hepatitis A Vaccine in
Monkeys
Li Chengming, Chen Jiangting , Wan Zongju et al(NationalInstitutefortheControlofPharmaceuticaland
BiologicalProducts,Beijing100050)
Abstract Inactivated hepatitis A(HA)vaccine was prepared by culturing the strain TZ84 of HA virus in
2BS cells , and the immunogencity of it was studied in common marmosets and Macaca mulattas. The result
showed that good antibody respones were induced in the 2 kinds of monkeys. The vaccine could also protect the
monkeys from the challenge with strong virus strain(Luxing). It indicated that the inactivated HA vaccine had
good immunological effect .
Key words Inactivated hepatitis A vaccine Common marmoset Macaca mulatta
甲型肝炎灭活疫苗的免疫效果在国际上已得到
公认[ 1～3 ].日本森次保雄等用狨猴感染甲型肝炎病
毒,建立了理想的甲型肝炎动物模型.Korzaya等用
猕猴属类(Macaca)建立起甲型肝炎动物模型.国内
毛江森等用红面猴作为甲型肝炎病毒的敏感动
物[ 4 ,5 ].练幼辉等用恒河猴(Macaca Mulatta)和普通
狨猴(Common Marmoset)进行了甲型肝炎动物模型
的对比研究,证实普通狨猴从肝脏病理反应,甲肝抗
体和肝功能改变等方面比恒河猴明显.因此,选择
普通狨猴和恒河猴作为实验动物进行甲型肝炎灭活
疫苗的研究.现将结果报告如下.
材料与方法
11甲型肝炎灭活疫苗
甲型肝炎病毒TZ84毒株第30代,在人胚肺二
倍体细胞2BS株上大量培养后,经过PEG处理,分
子筛和超滤提纯,用1:4000甲醛灭活,经定量测定,
甲肝病毒抗原含量为1000 UPml ,制成含110 mgPml
氢氧化铝吸附甲型肝炎灭活疫苗,分装量为110 mlP
支,4℃保存.
21甲型肝炎病毒野毒株
211 TZ84毒株:用人胚肺二倍体细胞2BS株
连续传3代后,冻融收获,20 000 rPmin超离心收集
甲肝病毒,抗原定量为1500 UPml.
212 鲁兴株:中国医学科学院医学生物学研究
所,收集甲型肝炎病人急性期粪便制备,经生物学证
实含有甲型肝炎病毒,可作为甲型肝炎病毒攻击用
野毒株[ 6 ].
31实验动物
311 普通狨猴:由天津医科大学实验动物中心
从澳大利亚引进种猴繁殖之子代,年龄1～3岁,体
重250～400 g ,接种前测定抗2HAV阴性,肝功能及
122 中国生物制品学杂志1999年第12卷第4期 Chin J Biologicals 1999 ,Vo1. 12. No . 4
X
XX中国医学科学院医学生物学研究所
唐山怡安生物工程有限公司
1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
肝脏组织活检正常.
312 恒河猴:系中国医学科学院医学生物学研
究所实验动物中心提供,年龄1～2岁,体重115～2
kg ,接种前抗2HAV阴性,血清ALT和肝组织活检正
常.
41接种方法及剂量
疫苗采用肌内注射,每只110 ml.接种后28 d ,
用野毒株攻击,静脉注射,每只110 ml.
51标本的采集
511 血清:接种前后和攻击后每周空腹时采血
1次,第8 W后每两周采血1次,室温放置过夜,第2
d分离血清.
512 肝组织活检:接种前后每月肝穿活检1
次.4个月后将猴处死,取肝脏,心脏,肺脏,胃,十
二指肠,肾脏和肠系膜淋巴结等进行肝组织病理检
查.
513 采便:攻击后第2 d起每天收集大便1次,
连续收集1个月,以后每周收集1次,收集1个月,
置- 20℃保存,备检.
61检测方法
611 甲肝病毒抗原定量检测:用唐山怡安生物
工程有限公司生产的EIA甲肝抗原定量检测试剂盒
检测.根据甲肝抗原参比品作标准曲线,样品抗原
含量用平行线定量法计算,以UPml表示.
612 抗2HAV IgM :用唐山怡安生物工程有限公
司生产的抗2HAV IgM EIA试剂盒检测.
613 抗2HAV :用唐山怡安生物工程有限公司
生产的抗2HAV EIA试剂盒检测.根据WHO甲肝抗
体标准品作标准曲线,样品抗体效价用平行线定量
法计算,以mIUPml表示.
614 ALT:采用EncoreⅡ型自动生化分析仪.
615 ICD :采用生化分析法.
616 猴粪便甲肝病毒测定:用PBS将猴便制成
20 %的大便悬液, - 70℃冻融3次,10 000 rPmin离心
30 min.取上清1:10稀释,接种2BS细胞,盲传两
代,冻融收获后,采用EIA方法进行甲肝抗原测定.
617 肝组织病理:参照Krawezymski ,1981肝脏
病变分度方法.
71实验分组
711 免疫组:2只普通狨猴,4只恒河猴分别接
种甲型肝炎灭活疫苗1支.
712 加强免疫组:普通狨猴和恒河猴接种甲型
肝炎灭活疫苗1支.4 W时,其中1只普通狨猴和1
只恒河猴分别加强接种1次.
713 保护实验组:普通狨猴和恒河猴接种甲型
肝炎灭活疫苗1支.4 W时,其中1只普通狨猴和2
只恒河猴分别用鲁兴株(20 %大便悬液110 mlP只)
进行攻击.
714 对照组:鲁兴株直接攻击2只普通猴猴和
2只恒河猴.
715 病毒感染组: TZ84毒株第3代感染2只普
通狨猴和3只恒河猴.
结果
11普通狨猴的免疫反应
甲型肝炎灭活疫苗接种2只普通狨猴后第2W
出现抗2HAV阳转,至第4W抗体滴度已达625～
2500 mIUPml.抗2HAV IgM于接种后2～3W阳转,最
高滴度1:1000 ,抗2HAV IgM持续5～10W转阴.
ALT无异常升高现象.肝活检未见病理改变.
4W后,1只狨猴再接种甲型肝炎灭活疫苗1
支;另对1只狨猴用甲型肝炎病毒野毒鲁兴株攻击.
结果2只普通狨猴均出现抗HAV峰值反应,攻击或
加强免疫后第2W抗2HAV达到10000 mIUPml ,持续
4W ,降至2500 mIUPml ,ALT无异常升高.攻击或加
强免疫后肝活检未见病理改变.见图1和图2.攻
击后的普通狨猴大便未见甲肝病毒排出.
图1 普通狨猴的甲型肝炎灭活疫苗免疫反应
Fig 1. Antibody response of common marmosets to inac2
tivated hepatitis A vaccine
21恒河猴的免疫反应
甲型肝炎灭活疫苗接种4只恒河猴第2W后出
现抗2HAV阳转,至第4W抗体滴度已达625～2500
mIUPml ,抗2HAV IgM于接种后2～3W阳转,最高滴
度1:1000 ,抗2HAV IgM持续1～3W后转阴.ALT无
异常无高现象.肝活检未见病理改变.
222 中国生物制品学杂志1999年第12卷第4期 Chin J Biologicals 1999 ,Vo1. 12. No . 4
1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
图2 甲肝病毒野毒攻击甲肝灭活疫苗免疫狨猴肝组
织切片
Fig 2. Section of liver tissue of immunized marmostes af2
ter being chall enged with hepatitis A wild virus
4W后,其中1只恒河猴加强免疫1次,结果出现抗2
HAV反应峰,加强后第2W抗2HAV达到40 000 mIUP
ml ,持续4W后降至10 000 mIUPml ,ALT无异常升高
现象且未见肝脏病理改变.
4W后,另2只用鲁兴株攻击,结果抗2HAV增长
4倍,攻击后第2W抗2HAV效价达到10 000 mIUPml ,
2W后开始下降,保持在2 500 mIUPml.见图3.攻
击后的恒河猴ALT无异常升高现象,肝活检未见病
理改变,大便未见甲肝病毒排出.
31野毒感染普通狨猴和恒河猴的反应
甲型肝炎病毒鲁兴株大便悬液接种2只普通狨
猴后,1只第3W出现抗2HAV阳转,至第12W抗体
滴度已达1:16 384 ,抗2HAV IgM于接种后第2W出
现阳性,滴度为1:20 000.一直持续到第10W ,12W
时略有下降,为1:10 000.ALT未见异常反应.肝
活检在第6W开始出现肝脏组织学病理改变.大便
悬液检测7～26 d排毒.另1只狨猴第4W抗2
HAV阳转,第12 W抗体滴度为1:64.肝活检在第
10W开始出现肝脏组织学病理改变.大便悬液检测
6～22 d排出甲型肝炎病毒.
甲型肝炎病毒鲁兴株大便液接种恒河猴后,第
2W出现抗2HAV阳转,一直保持在较低水平.至第
8W抗体效价达到156～625 mIUPml ,抗2HAV IgM一
直未阳转.ALT未见异常反应.肝活检未见肝脏组
织学病理改变,9～15 d大便排出甲型肝炎病毒.见
表1,图4.
图3 甲型肝炎灭活免疫恒河猴的反应
Fig 3. Antibody response of macaca Mulatta to inacti2
vated hepatitis A vaccine
图4 甲肝病野毒(鲁兴株)攻击狨猴的肝组织切片
Fig 4. Section of liver tissue of immunized marmosts af2
ter being challenged with strain Luxing of hepatitis A virus
表1 甲型肝炎病毒鲁兴株感染普通狨猴和恒河猴的反应
Table 1. Reactions of common marmoset and macaca mulatta infected with strain Luxing of hepatitis A virus
No.appear when AntibodyThe highest antibody titerAnti2HAV IgMLiver pathologyHAV in feces
Cm131:16 384> 1:20 000+ ++
Cm241:64> 1:20 000+ ++
Mm12625mIUPml--+
Mm22156mIUPml--+
41TZ84毒株第3代感染普通狨猴的反应
甲型肝炎病毒TZ84株第3代接种2只普通狨
猴后2W出现抗2HAV阳转,至第4W抗体效价已达
2 500 mIUPml ,最高到10 000 mIUPml ,持续2W ,然后
保持在2 500 mIUPml水平.抗2HAV IgM于接种后第
2W出现阳转,滴度为1:1 000 ,第4W时最高为
322 中国生物制品学杂志1999年第12卷第4期 Chin J Biologicals 1999 ,Vo1. 12. No . 4
1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
1:5 000 ,第6～8W消失.1只狨猴ALT在第4～6W
时略有升高,以后趋于正常.肝穿活检未见病理改
变.大便悬液检测3～20 d排出甲肝病毒.
51TZ84毒株第3代感染恒河猴的反应
甲型肝炎病毒TZ84毒株第3代接种3只恒河
猴后第2W出现抗2HAV阳转,至第4W抗体效价已
达625～2 500 mIUPml ,最高达到2 500～10 000 mIUP
ml ,持续6～8W.然后开始下降,保持在2 500～10
000 mIUPml水平.抗2HAV IgM于接种后第2W出现
阳性,滴度为1:1000 ,第4W时最高为1:5000～
25000 ,第10W时全部阴转,1只恒河猴ALT在第1～
2W时略有升高,以后趋于正常.肝穿活检未见病
理改变.大便悬液检测9～15 d排出甲肝病毒.
讨论
甲型肝炎病毒TZ84毒株在2BS细胞传代至第
3代,在普通狨猴和恒河猴体内没有肝脏病理改变,
只有一过性ALT和ICD变化.说明甲型肝炎病毒
TZ84毒株第3代致病性已经略有减弱,用于灭活疫
苗的生产更为安全可靠.
普通狨猴对甲型肝炎病毒鲁兴株攻击有明显的
肝脏病理改变,2只狨猴甲肝抗体滴度分别为1:64
和1:16348 ,ALT和ICD均有升高,肝脏组织学病理
也有改变证实甲型肝炎病毒鲁兴株有致病性,可作
为甲型肝炎病毒野毒攻击使用.
国内对普通狨猴的研究较少.该猴种体重轻,
饲养条件严格,价格昂贵,其ALT,ICD的参考范围
尚不能十分准确确定.恒河猴来源容易,饲养简单,
价格便宜,与人类免疫反应类似.猴体实验研究结
果表明:普通狨猴与恒河猴甲肝抗体水平基本一致,
但肝脏病理反应比恒河猴敏感.因此,在进行甲肝
灭活疫苗免疫原性实验时,选择普通狨猴和恒河猴
同时进行,相互弥补较为适宜.
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(1998209228收稿,1998210227修回)
(上接209页)
专家片岗哲朗认为卡介菌纯核酸是免疫增强剂的有
效成分并具有抗肿瘤的活性[ 10 ],他将卡介菌纯核酸
加上一定的佐剂后,其免疫增强剂及抗肿瘤活性明
显增强,而BCG2PSN中多糖是否也起上述作用还有
待进一步研究.
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1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.
394272
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